猪各组织器官内肌生成抑制素基因mRNA表达谱的研究   总被引：7，自引：1，他引：7  

张锐  孙美榕  张红莲  杨捷  黄燕  陈绍红  杜慧  欧阳红生 《中国兽药杂志》2004,38(3):16-18

用Trizol试剂法提取军牧一号猪的骨骼肌、心肌、肝、肾、肺、脾、胰、脂肪的总RNA做RT-PCR和嵌套PCR,结果在军牧一号猪骨骼肌、心肌和脂肪组织内检测到了肌生成抑制素mRNA的表达,而在其他组织中未检测到.  相似文献   

猪肌生成抑制素基因成熟蛋白编码序列的表达与纯化     

张锐  孙美榕  欧阳红生  张玉静 《云南农业大学学报(自然科学版)》2004,19(3):255-259

 猪肌生成抑制素基因myostatin (MSTN)的cDNA去除信号肽后对成熟蛋白编码序列PCR扩增出1.2 kb片段,将该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109受体菌细胞,筛选阳性克隆测序分析,结果表明与设计序列完全一致。将该克隆载体的质粒DNA用带有BamH I和Sal I内切酶识别序列的另一对引物进行PCR扩增,将回收的1.2 kb PCR目的片段定向克隆到pET28a（+）表达载体上,成功地构建了猪肌生成抑制素成熟蛋白编码的原核表达载体。对成功构建表达载体阳性克隆在LB液体培养基中用IPTG诱导表达, SDS-PAGE凝胶电泳显示,重组菌表达的MSTN蛋白是以包涵体的形式表达的;SDS-PAGE凝胶经薄层扫描仪扫描分析,表达的MSTN包涵体蛋白占菌体不溶性蛋白含量的27.9%,表达的MSTN分子量为41 451.3D. 因为所构建的表达载体中含六聚组氨酸标签,则用His-trap亲和柱进行纯化后,纯度可达92.5%. 该试验为获得较好的猪肌生成抑制素基因抗原、制备抗体打下了良好的基础。  相似文献   

猪肌生成抑制素基因成熟蛋白编码序列的表达与纯化     

张锐  孙美榕  张红莲 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2004,32(9):53-56

猪肌生成抑制素基因myostatin(MSTN)的cDNA在去除信号肽后,对成熟蛋白编码序列PCR扩增出1.2kb片段,将该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109受体菌细胞,筛选阳性克隆,并测序分析,结果表明其与设计序列完全一致。将该克隆载体的质粒DNA用带有BamH 和Sal 内切酶识别序列的另1对引物进行PCR扩增,将回收的1.2kbPCR目的片段定向克隆到pET28a(+)表达载体上,成功地构建了猪肌生成抑制素成熟蛋白编码的原核表达载体。对成功构建的表达载体阳性克隆在LB液体培养基中用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳显示,重组菌表达的MSTN蛋白是以包涵体的形式表达的;SDS-PAGE凝胶经薄层扫描仪扫描分析,表达的MSTN包涵体蛋白占菌体不溶性蛋白含量的27.9%,表达的MSTN分子质量为41.4513ku。因为所构建的表达载体中含六聚组氨酸标签,用His-trap亲和柱进行纯化后,纯度可达92.5%。  相似文献   

鱼类基因组DNA提取方法的优化及PCR扩增   总被引：2，自引：0，他引：2  

张锐  孙美榕  林洽辉  杨燕贞  曾苑玲 《水利渔业》2006,26(4):7-9

以海水鱼军曹鱼为材料,分别采用4种不同处理方法———经典蛋白酶K法、CTAB法、改良SDS法及优化的一步法(ROSE)等提取基因组DNA,通过紫外分光光度计测定OD260/280值、琼脂糖凝胶电泳检测,结果显示这4种方法均可以获得较高质量的基因组DNA,该基因组DNA用于目的基因的PCR扩增,均能得到PCR扩增的特异条带。改良SDS法及优化的一步法更加方便、快捷,而且成本低廉。  相似文献