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为探究禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)对SPF雏鸡细胞凋亡相关信号通路的影响,通过REV感染1日龄雏鸡后,对其临床症状、大体病理学变化进行观察,并应用高通量测序及实时荧光定量PCR方法,检测并验证其法氏囊中与细胞凋亡信号通路相关的miRNA及其靶基因表达情况。结果显示:SPF雏鸡感染REV后第21天法氏囊萎缩最显著,法氏囊中gga-mir-18a-5p、gga-mir-155和gga-mir-222b-5p表达量显著下调,其靶基因分别为Caspase-6、Caspase-7和p27,上述靶基因表达量显著上调;同时还发现gga-mir-29b-3p表达量上调,其靶基因Mcl-1表达量下调。证明REV通过下调gga-mir-18a-5p、gga-mir-155和gga-mir-222b-5p以及上调gga-mir-29b-3p的表达量,来降低或增加对其靶基因的抑制,从而使促凋亡因子Caspase-6、Caspase-7和p27的表达量显著增加,同时抑凋亡因子Mcl-1表达量显著减少来促进细胞凋亡的发生。研究结果为REV致病机理的相关研究提供了理论依据。 相似文献
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选取31头经检测猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原和抗体均为阴性的5周龄断奶仔猪,随机分为对照组16头和试验组15头,对照组仔猪每头滴鼻4 mL PBS,试验组仔猪每头滴鼻4 mL 5×105TCID50.mL-1PCV2悬液。于PCV2接种当天剖杀4头仔猪作为对照组,分别于14、21和35 d剖杀4头对照组和5头试验组仔猪,采集肝脏。用激光共聚焦显微镜检测核因子κB/P65(NF-κB/P65)蛋白的核易位变化;蛋白提取法分别提取肝脏细胞核蛋白和胞浆蛋白,Western blot定量检测细胞核中NF-κB/P65和细胞浆中p-IκBα、MyD88蛋白含量的变化;电泳迁移率(EMSA)法检测细胞核中NF-κB DNA的结合率变化。检测结果显示,PCV2接种仔猪,肝脏中NF-κB/P65蛋白核易位逐渐增多,到21 d达到峰值;p-IκBα、MyD88、NF-κB/P65 DNA结合率在接种后均先升高后趋于恢复,并于21 d达到高峰。与对照组仔猪相比,肝脏中MyD88和NF-κB/P65蛋白含量以及NF-κB DNA结合率在14和21 d试验组均显著升高(P<0.05),35 d含量变化不显著;21 d时试验组p-IκBα蛋白含量显著升高。相关性分析显示,NF-κB/P65蛋白含量与MyD88含量、NF-κB DNA结合率之间存在显著正相关,相关系数分别是0.566和0.528。结果表明,PCV2可通过激活MyD88启动NF-κB信号途径;通过IκBα的磷酸化降解激活NF-κB,并促进其进行核易位,使NF-κB与DNA发生结合,调控相关炎性细胞因子的转录和表达。 相似文献
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为探讨猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)感染仔猪的淋巴结和脾脏淋巴细胞内钙信号变化在细胞凋亡中的作用,选取19头PCV2抗原和抗体均为阴性的5周龄健康断奶仔猪,随机分成对照组(4头)和试验组(15头),试验组仔猪通过滴鼻接种PCV2,并于接种后14、21和35 d分别扑杀5头,对照组仔猪滴鼻同量PBS后当天扑杀。所有仔猪扑杀时均取腹股沟淋巴结及脾脏,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光分光光度法检测细胞内Ca2+浓度,孔雀绿比色测定法检测Ca2+-ATP酶的活性,荧光定量RT-PCR检测钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA转录水平。结果表明:所有接种病毒仔猪腹股沟淋巴结及脾脏细胞凋亡率均极显著高于对照组(P<0.01),Ca2+浓度均极显著高于对照组(P<0.01);接种病毒仔猪腹股沟淋巴结Ca2+-ATP酶活性在21 d时显著下降(P<0.05),脾脏中Ca2+-ATP酶活性在21 d和35 d时显著下降(P<0.05);腹股沟淋巴结CaMKⅡmRNA转录在整个试验过程中无明显变化,但脾脏中CaMKⅡmRNA在PCV2接种后21 d和35 d比对照组显著上调(P<0.05)。结论:细胞内Ca2+超载是PCV2感染引起仔猪淋巴结及脾脏淋巴细胞凋亡的重要机制。 相似文献
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为探讨猪圆环病毒2型(PCV2)作用下淋巴细胞的免疫活性,本研究通过体外培养仔猪脾脏淋巴细胞及巨噬细胞(Mφ),分别以PCV2和PCV2+Mφ与淋巴细胞相互作用,同时设Mφ和空白对照组.培养0h、6h、12h、24 h后收取各组淋巴细胞,放射免疫法检测胞内cAMP和cGMP浓度.另外,选取15头PCV2阴性仔猪,每头滴鼻PCV2病毒悬液,分别于14d、21 d、35 d迫杀,每次5头,并设立阴性对照组4头.放射免疫法检测脾脏cAMP和cGMP浓度,并计算cAMP/cGMP比值.体外检测结果显示:PCV2对体外培养淋巴细胞内cAMP和cGMP浓度影响不大;而在Mφ存在时PCV2在6h时能显著降低cAMP和cGMP浓度和cAMP/cGMP比例(p＜0.05); 12 h时cGMP浓度下降(p＜0.05),cAMP和cGMP比例上升(p＜0.05); 24 h时cGMP浓度上升(p＜0.05),但cAMP/cGMP比例降低(p＜0.05).体内检测结果表明,PCV2能显著降低仔猪脾脏细胞内cAMP浓度(p＜0.05)及cAMP/cGMP比值(p＜0.05).该研究结果表明,在巨噬细胞存在时PCV2能够降低淋巴细胞内cAMP/cGMP的比值,从而影响淋巴细胞的功能. 相似文献
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PCV2感染仔猪急性期蛋白的变化 总被引：1，自引：1，他引：0
【目的】探讨实验性感染PCV2仔猪血清中急性期蛋白浓度和肝脏急性期蛋白表达的变化,为PCV2的致病机制和诊断提供有价值的资料。【方法】19头ELISA检测PCV2抗体阴性的5周龄健康断奶仔猪,随机分为对照组和攻毒组,在攻毒后不同时间采集血液和肝脏。用ELISA方法检测血清中APPs的动态变化,荧光定量RT-PCR测定肝脏中APPsmRNA表达,同时观察肝脏的组织病理学变化。【结果】仔猪接种PCV2后,肝脏出现实质细胞变性,结缔组织增生和嗜酸性粒细胞浸润为特征的病理学损伤;血清中,猪主要急性期蛋白(Pig-MAP)在攻毒后7d达到峰值,在7和10d显著高于对照组(P0.05);血清淀粉样蛋白A(SAA)在攻毒后7d和21d显著高于对照组(P0.05);血清载脂蛋白AⅠ(Apo-AⅠ)攻毒后21d显著高于对照组(P0.05),其余时间差异均不显著;PCV2感染后21d仔猪肝脏中结合珠蛋白(HP)、C-反应蛋白(CRP)、α1-酸性糖蛋白(AGP)和SAAmRNA的表达呈现升高的趋势。【结论】PCV2感染可引起仔猪肝脏出现以实质细胞变性坏死和结缔组织增生为特征的病理学变化,血清APPs浓度和肝脏APPsmRNA表达呈现不同的变化,其中Pig-MAP可以作为病程发展的重要检测指标,对监测PCV2感染、疾病的预后起重要作用。 相似文献
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尼罗罗非鱼微阵列Fosmid基因组文库的构建及基因筛选 总被引：1，自引：0，他引：1
以pCC2FOS为载体构建尼罗罗非鱼Fosmid基因组文库,共挑选115 200个单菌落,保存在300块384孔样品板中,构建4 800个行池、7 200个列池、300个板池和25个超级池,形成微阵列,并对其进行复制备份。该文库插入片段平均长度约为40 kb,覆盖约罗非鱼基因组的3倍。连续传代实验研究表明,文库具有良好的稳定性。由于构建超级池－板池－行、列池三级池系统形成的微阵列,有助于快速、准确、有效地筛选目的基因,仅需77个PCR反应(超级池25 板池12 行池16 列池24)就能筛选到含有目的基因的一个单克隆,解决了普遍存在的文库筛选难题。通过文库尝试筛选18个与性别分化和生长相关基因,均获得2~5个阳性克隆,说明文库具有较好的实用性。 相似文献
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近年来，云南省宣威市农业机械化发展取得一定成效，农业产业结构不断优化，粮食生产能力逐渐提高，产业化经营效果明显，示范基地建设成效显著。但也存在不足，为弥补这些不足，推动宣威市推进农业机械化进一步发展，需要采取改进和完善措施，即制定农业发展规划，重视技术推广工作，发挥政策驱动作用；并扩大市场占有份额，注重优秀人才引进。 相似文献
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冬枣以质优味美而名闻遐尔．但因前两年为了追求产量而滥用植物生长素(主要是赤霉素)．导致品质下降、销量下跌．最终造成果农的种植效益下降的恶果。为了帮助果农走上正确的致富之路．合理选择使用生长素．山东省滨州市果树站于2004年对1．8％爱多收在冬枣上的应用效果进行试验，并与常用的赤霉索作比较，其结果如下。 相似文献
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