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为快速、准确、灵敏检测猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）,以PEDV N基因为靶标设计引物,建立了一种PEDV SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法。该方法最低可以检测到10个拷贝的病毒核酸,与猪传染性胃肠炎病毒、猪δ冠状病毒和猪轮状病毒等胃肠道病毒均无交叉反应,批内、批间重复试验的变异系数均在2%以内,表明该方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。运用该方法对2018—2019年采集自山东省不同地区猪场的161份临床样品进行检测,检测结果与RT-PCR方法完全一致。以上结果说明,本试验所建立的SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR检测方法为PEDV的快速检测提供了良好工具和技术支持。 相似文献
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为了解山东省猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）基因组遗传演化特征,将山东省滨州市某猪场的PEDV阳性样品接种Vero E6细胞,结果成功分离到1株PEDV,将其命名为SD20BZ01株。通过RT-PCR分段扩增病毒基因组,经测序、拼接获得SD20BZ01株全基因组序列,并将其与GenBank收录的参考毒株序列进行同源性比对和遗传进化分析。全基因组序列分析结果显示,SD20BZ01株与我国2010年以来流行的GII-b亚群变异株序列同源性为97.8%~98.7%,明显高于CV777、DR13、SM98、SD-M等早期经典毒株,因此SD20BZ01属于GII-b亚群变异株。基于S基因的遗传进化关系与基于全基因组序列的遗传进化关系基本一致。与CV777株相比,SD20BZ01株S蛋白在中和抗原表位COE处有10个氨基酸突变,与近年来变异株S蛋白的氨基酸序列基本一致,说明GII-b亚群PEDV的变异规律逐渐趋于稳定。本研究为山东省PEDV流行病学研究及其流行控制策略的制定提供了理论依据。 相似文献
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禽网状内皮组织增生症病毒（reticuloendotheliosis virus，REV）是一种常见的禽肿瘤性病毒，可诱发感染鸡群免疫抑制，给我国养禽业带来巨大经济损失。本试验运用DF-1细胞接种方法，在山东省某父母代白羽肉种鸡场鸡群中分离到1株REV，将其命名为SD2101株。为掌握SD2101株基因组遗传演化特征，设计合成6对引物，通过PCR扩增获得了SD2101株的前病毒全基因组序列，并与GenBank下载的参考毒株进行了序列比对和遗传进化分析。结果显示：SD2101株前病毒全基因组具有典型复制完整型逆转录病毒的基因组结构，与2011年分离自江苏省的鸡源REV野毒株HA1101同源性最高；遗传进化分析发现，SD2101株与大部分国内分离株处于同一进化支上。为了解SD2101株的致病性，将分离毒株接种于1日龄SPF鸡，通过体质量、免疫器官指数和灭活疫苗免疫应答等指标进行评价。结果显示，SD2101株对1日龄SPF鸡的生长和免疫功能具有明显的抑制作用。综上，与参考毒株相比，SD2101株基因组序列变异程度较小，具有一定致病作用，提示在生产中应加强对REV的关注和监测。本研究为REV的流行病学研究提供了信息资料。 相似文献
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