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为建立鸭腺病毒3型(duck adenovirus 3,DAdV-3)一种基于SYBR Green I染料的荧光定量PCR诊断方法,本试验根据DAdV-3基因组序列中相对保守的Fiber-2基因,通过普通PCR扩增,构建pMD19-Fiber2重组质粒为阳性标准品,在此基础上设计合成特异性引物进行实时荧光定量PCR方法的建立,对其灵敏性、特异性和重复性进行评价,并初步应用于临床样本检测。结果显示,针对DAdV-3的Fiber-2基因建立的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法线性关系良好,相关系数0.998 9;检测DAdV-3的灵敏度为3.6×102 copies/μL,敏感性比普通PCR检测方法高100倍;该方法对鸭腺病毒1型、鸭疫里默杆菌等其他常见病原均无交叉扩增反应,批内、批间变异系数均小于5%;临床样本检测与普通PCR符合率100%。以上结果表明,所建方法特异性强、敏感性高且重复性好,适用于临床检测,该方法可为DAdV-3的临床诊断、流行病学调查以及防控提供技术支持。 相似文献
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为确定重庆市某患病猪场的致病原并探究其生物学特性及分子进化特性，首先利用PCR方法对组织病料进行检测，结果发现副猪嗜血杆菌（Hps）和圆环病毒3型（PCV3）两种病原场为阳性。然后进行细菌分离，通过形态、培养特征和16S rDNA测序对分离菌株进行鉴定，并分析其血清型、药物敏感性、耐药基因以及生长曲线等主要生物学特性。经鉴定确定致病菌株为Hps血清5型，分离菌株对头孢他啶、苯唑西林、新霉素、卡那霉素、氯霉素、米诺环素、多黏菌素B和四环素表现为耐药，共检测到9种耐药基因；对PCV3通过分段扩增、拼接获得完整的基因组序列，通过生物学软件分析其基因结构以及基因型，经测序分析发现PCV3基因组全长2 000 bp，GC含量为50.45%，基因型为PCV3a，与广西MH823221株和美国最早报道的KT869077株具有较高的亲缘关系。本研究确定了患病猪的致病原及其主要生物学特性及分子进化特性，为临床有效防控Hps和PCV3混合感染提供了依据。 相似文献
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