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用PCV2 Cap蛋白单克隆抗体预包被酶标板,将杆状病毒表达系统表达的PCV2 Cap蛋白作为检测用抗原,利用捕获包被法建立了间接ELISA法用于猪圆环病毒2型抗体的检测.通过优化ELISA条件,研制试剂盒并应用于圆环病毒2型疫苗的免疫效果检验.利用研制的试剂盒与IFA、商品化进口和国产同类试剂盒对178份猪血清进行平行检测,总符合率分别为96.63％、97.75％和84.27％,与其他几种常见猪病毒抗体阳性血清无交叉反应.试剂盒批内、批间变异系数分别为2.35％ ～4.06％和4.87％ ～ 6.54％,2～8℃保存15个月稳定,适合于对不同来源猪圆环病毒2型疫苗人工免疫猪血清抗体进行检测. 相似文献
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用狂犬病毒单克隆抗体预包被酶标板,将纯化的狂犬病毒作为检测用抗原,利用捕获包被法建立了间接ELISA法用于犬狂犬病病毒抗体的检测。通过优化ELISA条件,研制试剂盒并应用于犬狂犬疫苗的免疫效果检验。利用研制的试剂盒与RFFIT、商品化同类试剂盒对30份犬血清进行平行检测,总符合率分别为90%和93.33%,与其它几种常见犬病毒抗体阳性血清无交叉反应。试剂盒批内、批间变异系数分别为1.45%～5.79%和2.35%～7.21%,2～8℃保存12个月稳定。基于用单抗预包被后再包被检测抗原,本试剂盒检测样品抗体的灵敏度和稳定性得以显著提高,因此适合于不同来源狂犬疫苗人工免疫犬血清的RV抗体水平监测。 相似文献
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检测犬抗狂犬病毒抗体的胶体金免疫层析法的建立及应用 总被引：1，自引：0，他引：1
为建立一种简便快速的胶体金免疫层析方法(GICA)以用于检测犬抗狂犬病毒抗体,本研究运用间接反应一步法原理,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒用以标记抗犬IgG抗体形成金-抗犬IgG抗体复合物,制成金标结合垫,加上包被有狂犬病毒糖蛋白的硝酸纤维膜,即制成胶体金免疫层析试纸条.样品中狂犬病? 毒抗体与金标记抗体结合后沿硝酸纤维素膜移动,与膜上的糖蛋白特异结合形成肉眼可见的红色线条.试验结果显示,GICA试纸条与抗狂犬病毒抗体有特异性反应,与犬瘟热病毒、犬细小病毒等的抗体无交叉反应;GICA与标准ELISA法比较的总符合率为99.4%.结果表明,GICA试纸条检测抗狂犬病毒抗体特异性强、成本低,操作简便,不需任何仪器,特别适用于野外以及现场使用. 相似文献
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将杆状病毒表达系统表达并经梯度离心纯化的PCV2Cap蛋白作为标准品,利用双抗夹心法建立了针对猪圆环病毒2型Cap蛋白的ELISA检测方法,并应用于圆环病毒2型基因工程疫苗的质控。结果表明,多抗最适包被浓度为1μg/mL,最佳封闭液为1％BSA,最佳单抗反应浓度为2μg／mL,反应时间60min,最佳二抗使用稀释度1：40000,反应时间60min。该方法与St9细胞、BSA和其他猪病病毒抗原之间无交叉反应,最低检测抗原量为5ng。 相似文献
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DNA荧光染色和PCR技术在PRRSV冻干疫苗中支原体检测的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
为完善猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)冻干疫苗生产各阶段的支原体检测体系,本研究分别应用DNA荧光染色法、PCR法和病毒分离培养法检测疫苗生产中的细胞、种毒、半成品、成品,分析方法的可行性和优势.结果显示,DNA荧光染色法检测PRRSV半成品抗原液的支原体污染能够于6d内得到结果,与其余半成品检验项目用时相近,适宜在生产中应用.而采用DNA荧光染色、PCR和病毒分离培养法对我们生产的10批PRRSV冻干疫苗成品的支原体检测结果显示,DNA荧光染色法与病毒分离培养法检测的结果一致,1批疫苗的PCR检测结果与培养法检测结果不符,即PCR法检测阳性,但DNA荧光染色和病毒分离培养法检测为阴性.由此证明,DNA荧光染色法和PCR法检测疫苗中支原体的结果可靠,而PCR法检出率更高.DNA荧光染色法和PCR法操作简便、快速、经济,可以作为疫苗生产质量的内控标准,提高支原体的检出率,保证疫苗质量. 相似文献
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抗狂犬病毒单克隆抗体的研制及应用 总被引：2，自引：0，他引：2
应用杂交瘤技术获得4株分泌抗狂犬病毒(Rabies virus,RV)单克隆抗体细胞株,并对其特性进行分析。经鉴定,它们所分泌的抗体类型为IgG1,腹水效价为1∶105~1∶107,ELISA法和间接免疫荧光检测(indirect immunofluoreseent assay,IFA)结果表明:该4株单抗对RV有良好的特异性,对正常Vero细胞及人白蛋白和其他细胞培养物无非特异性反应。将这些单抗腹水进行Protein G亲和层析纯化后获得的纯化抗体用于制备反相亲和层析柱,并以反相亲和层析法纯化RV以获得高纯度RV抗原。应用纯化的RV建立胶体金免疫层析法(gold-immunochromatography assay,GICA)检测RV抗体血清,结果显示,GICA与标准ELISA法检测比较的总符合率为96.1%。 相似文献
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