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张皓淳 《国外畜牧学(猪与禽)》2022,42(1):32-36
为了制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p30蛋白卵黄抗体,研究卵黄抗体的生物活性。试验构建了p ET-32a-p30原核表达载体,制定了科学的免疫程序和样本采集方法。提取卵黄液,进行二次盐析,得到对应的卵黄抗体。用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)测定卵黄抗体效价,用免疫印迹（Westernblotting）技术对其生物活性进行鉴定。ELISA试验表明：首次免疫p30蛋白7d后,能够在蛋鸡的血清中检测出抗体（Ig Y）,14d后在卵黄中能够提取到Ig Y,35d后Ig Y效价达到最高值。IgY具备和哺乳动物产生的IgY不同的生物活性,并可具有较高的特异性和稳定性,在免疫学研究中具有重要的价值。利用Ig Y进行实验检测,具有突出优势。通过抗原即ASFV p30蛋白免疫蛋鸡,分离提纯免疫蛋白,检测其生物活性,可用于鉴定非洲猪瘟。 相似文献
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张皓淳 《国外畜牧学(猪与禽)》2022,(2):35-42
为了实现非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)p54基因在大肠杆菌中的高效表达,同时建立以ASFV-p54重组蛋白为抗原的间接ELISA抗体检测方法,本试验根据Gen Bank(序列号：NC＿044943.1)公布的ASFV p54的基因序列,设计一对特异性引物,扩增构建p GEX-6P-1-p54原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行复制,经IPTG诱导表达,对重组蛋白利用SDS-PAGE分析和免疫印迹鉴定正确后,进行表达条件优化,并纯化重组蛋白。随后用ASFV-p54重组蛋白为包被抗原,通过条件优化、特异性试验、敏感性试验和重复性试验,建立一种稳定的血清ASFV抗体检测方法。结果显示,ASFV p54基因成功克隆到p GEX-6P-1原核表达载体中,得到p GEX-6P-1-p54原核表达质粒;转化E. coli菌株BL21(DE3)中,经诱导表达得到重组蛋白,大小为46k Da;成功建立测定ASFV抗体的间接ELISA方法,优化后确定最佳包被浓度为1.2μg/mL,待检血清最佳稀释倍数1∶100,最佳封闭液为1%BSA,酶标抗体最佳稀... 相似文献
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猪伪狂犬病是集约化种猪场较为常见的一种猪疾病,对养猪业发展有着较大危害,具有高度接触性、热性等特点。本文主要围绕集约化种猪场猪伪狂犬病诊断及净化策略等方面展开讨论,针对病毒特征、流行特点和发病机制等诊断猪狂犬病,并制定针对性净化措施,为养猪场良好发展提供借鉴。 相似文献
4.
为研究抗菌肽NZ2114对奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌的杀菌效果,本试验通过细胞活性检测、流式细胞术和电镜观察等方法检测在抗菌肽NZ2114作用下金黄色葡萄球菌的细胞膜完整性、细胞形态和细胞耐药程度的变化。试验结果表明葡萄球菌细胞膜可被抗菌肽NZ2114损坏,同时在电镜下细胞体积萎缩,且耐药性明显降低。证明抗菌肽NZ2114针对金黄色葡萄球菌有一定的抑制杀菌效果。 相似文献
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张皓淳 《国外畜牧学(猪与禽)》2022,(2):35-42
为了实现非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)p54基因在大肠杆菌中的高效表达，同时建立以ASFV-p54重组蛋白为抗原的间接ELISA抗体检测方法，本试验根据Gen Bank(序列号：NC＿044943.1)公布的ASFV p54的基因序列，设计一对特异性引物，扩增构建p GEX-6P-1-p54原核表达质粒，在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行复制，经IPTG诱导表达，对重组蛋白利用SDS-PAGE分析和免疫印迹鉴定正确后，进行表达条件优化，并纯化重组蛋白。随后用ASFV-p54重组蛋白为包被抗原，通过条件优化、特异性试验、敏感性试验和重复性试验，建立一种稳定的血清ASFV抗体检测方法。结果显示，ASFV p54基因成功克隆到p GEX-6P-1原核表达载体中，得到p GEX-6P-1-p54原核表达质粒；转化E. coli菌株BL21(DE3)中，经诱导表达得到重组蛋白，大小为46k Da；成功建立测定ASFV抗体的间接ELISA方法，优化后确定最佳包被浓度为1.2μg/mL，待检血清最佳稀释倍数1∶100，最佳封闭液为1%BSA，酶标抗体最佳稀... 相似文献
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