非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立     

张芳源  蔺雅婷  杨大为  陈虎  李桂梅  单虎 《中国畜牧兽医》2023,(5):2012-2022

【目的】建立快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)抗体的间接ELISA方法。【方法】根据GenBank收录的ASFV分离株全基因组中的CP204L基因序列,在不影响氨基酸序列的前提下进行密码子优化,克隆到pCold TF冷休克表达载体,构建重组质粒pCold TF-p30。利用大肠杆菌原核表达系统进行IPTG诱导表达并对诱导时间和诱导浓度进行优化。用His标签镍柱对重组蛋白P30进行纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定后,用纯化后的P30重组蛋白作为抗原,建立ASFV抗体间接ELISA检测方法并对反应条件进行优化,检验该方法的特异性、灵敏性和重复性,并用该方法与商品化试剂盒进行对比。【结果】重组质粒成功转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后以可溶性蛋白形式表达,在约82 ku处有目的蛋白特异性条带。当16℃诱导12 h时蛋白表达量最高,不同IPTG浓度诱导无明显差异。Western blotting结果显示,P30重组蛋白可与ASFV阳性血清产生特异性反应,表明其具有良好的反应原性。建...  相似文献   

过量表达 DXR 基因提高青蒿中青蒿素的含量   总被引：2，自引：1，他引：1  

陈韵斐  张芳源  唐克轩 《上海交通大学学报(农业科学版)》2012,30(5):19-23

青蒿素是从菊科植物青蒿地上部分提取的一种含过氧桥结构的倍半萜类物质,是治疗疟疾最有效的药物。青蒿素在青蒿中的含量较低。为了提高青蒿素含量,根据GenBank上公布的青蒿素生物合成途径中关键酶基因DXR的编码区序列,从青蒿叶片cDNA中克隆了DXR基因并将其构建到植物表达载体pFSN中。通过根癌农杆菌介导转化青蒿,获得14株转基因青蒿,经PCR鉴定外源基因已插入青蒿基因组中。采用HPLC-ELSD方法对青蒿素含量进行测定,转基因青蒿中青蒿素含量最高达到野生型的2.84倍,证明了过量表达DXR基因能够有效提高青蒿中青蒿素的含量。  相似文献   

关于农业信息服务网络化建设的建议     

张芳源 《农业图书情报学刊》2011,23(12):31-34

农业信息化从本质上说．是充分利用业,提高农业生产经营管理水平的过展的新阶段。信息化建设已成为现代业和农村经济发展提供了科技支撑。现代信息技术的最新成果,不断加快农业科技进步．积极发展现代农程。信息化为全球农业发展注入了前所未有的活力．也开启了农业发农业建设和新农村建设的重要内容。农业信息化的发展和应用,为农  相似文献