马腺疫链球菌 FNE 基因的克隆及原核表达     

徐全圆  刘建华  苏艳  加尔肯  王世民  冉多良 《动物医学进展》2014,(12)

采用 PCR 方法从马腺疫链球菌新疆分离株中扩增 FNE 基因片段,克隆至 pMD19-T 载体。利用分子生物学软件分析测序结果,将 FNE 截短基因亚克隆至原核表达载体 pET-30a 中,转化到大肠埃希菌（E．coli）BL21（DE3）感受态细胞,以 IPTG 诱导 FNE 重组蛋白的表达,用 SDS-PAGE 和 Western blot 法分析蛋白表达及其反应原性。序列分析显示,其与 GenBank 收录的马腺疫链球菌4047（登录号YP002747216）核苷酸序列和氨基酸序列同源性均为99％。采用 PCR 法扩增到675 bp 的 FNE 截短基因片段构建重组表达载体获得重组蛋白,经 SDS-PAGE 分析在46 ku 处出现明显条带,Western blot 分析显示具有反应原性。成功克隆和表达了马腺疫链球菌的 FNE 截短基因,为重组 FNE 蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。  相似文献   

马链球菌马亚种FNEB蛋白的截短表达及其免疫保护性研究     

徐全圆  石明  杨夷平  李娜  刘建华  加尔肯  冉多良 《中国预防兽医学报》2015,(2):132-135

为研究马链球菌马亚种FNEB蛋白的免疫保护性,本研究采用PCR方法从马链球菌马亚种新疆分离株中扩增FNEB基因部分片段,克隆于原核表达载体p ET-30a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和western blot分析显示,重组蛋白大小约60 ku,具有良好的抗原性。将纯化的重组蛋白免疫小鼠后,以马链球菌马亚种新疆分离株进行攻毒,结果显示该重组蛋白对免疫组小鼠具有保护力,保护率为65%。本研究克隆了马链球菌马亚种的FNEB截短基因并表达了相应重组蛋白,免疫小鼠后能够提供较好的保护,为重组FNEB蛋白亚单位疫苗的研制奠定基础。  相似文献   

猪圆环病毒病疫苗的现状与发展          下载免费PDF全文

徐全圆  ;陈家锃  ;周升绪 《中国猪业》2014,9(11):53-54

防控猪圆环病毒病最有效的手段是疫苗免疫,现有的疫苗主要有亚单位疫苗、嵌合病毒灭活苗和全病毒灭活苗。但是这些疫苗主要诱导体液免疫,不能清除肠道中的猪圆环病毒,病猪依然可以通过肠道持续向外排毒。而黏膜免疫,尤其是肠黏膜免疫系统,可弥补体液免疫的缺陷,对肠道中的猪圆环病毒有杀灭作用,因此体液免疫与黏膜免疫协同作用的复合产品,是猪圆环病毒病疫苗研发的新趋势。  相似文献