甲型流感病毒NP蛋白原核表达及其金标检测方法的建立     

王云龙  贾丽锋  曹刚强  李玉林  李恒思  昌静峰 《动物医学进展》2010,31(10)

构建甲型流感病毒NP基因重组质粒,制备NP蛋白,建立甲型流感病毒胶体金检测方法。设计引物,扩增人工合成的甲型流感病毒株A(H5 N1)(GenBank登录号AY585439)NP DNA基因,构建pET-30 Xa/LIC-NP重组质粒,转化入原核表达系统E.coliBL21 Gold中进行表达和纯化。结果制备了纯度高达900 mL/L的甲型流感病毒NP融合蛋白,并初步建立了金标检测方法。  相似文献   

O型口蹄疫病毒VP1基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立     

王云龙  孙强  昌静峰  李玉林  王国强  董彩文  刘旺根  梁晓艳  孙新城 《动物医学进展》2011,32(5):31-35

表达O型口蹄疫病毒VP1蛋白,用于O型口蹄疫病毒的检测.以质粒T234/FMDV为模板,PCR扩增VP1基因片段,构建重组质粒pET-41b/VP1,转化表达菌BL21(DE3),IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot进行分析检测,目的蛋白经镍离子亲和层析纯化,以纯化的目的蛋白包被,建立了间接...  相似文献   

甲型H1N1流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法的初步建立     

王云龙  周春峰  孙新城  李玉林  陈冬焕  李恒思  昌静峰  王国强  董彩文  刘旺根 《动物医学进展》2011,(8):37-41

建立甲型H1N1流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法,通过优化IPTG浓度和诱导时间确定HA融合蛋白的最佳表达条件,并进行Western bloc和血凝试验鉴定.用纯化蛋白制备单克隆抗体,建立检测甲型H1N1流感病毒的双抗体夹心ELISA检测方法,对其交叉反应、符合率进行验证.结果表明,HA蛋白在BL21 (DE3)中...  相似文献   

人脂联素原核表达纯化及活性检测     

王云龙  李永超  昌静峰  李玉林  王国强  邓黎黎  陈冬焕  董彩文  孙新城  刘旺根  梁晓艳 《动物医学进展》2011,(10):36-39

为了克隆人脂联素基因(ACRP30),获得有免疫活性的重组人脂联素,以人皮下脂肪组织为材料,提取总RNA,通过RT-PCR得到ACRP30基因.构建重组质粒pET-CKS-ACRP30,转化表达茵BL21(DE3),以IPTG诱导表达人脂联素重组蛋白,利用镍亲和层析纯化,Western blot鉴定其活性,双抗体夹心法...  相似文献