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人朊蛋白基因的克隆与原核表达 总被引:3,自引:1,他引:3
以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein,PrP)基因Prnp户的开放阅读框(ORF),与pMD -18T载体连接后转入E.coli JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99.6%,推导的氨基酸序列同源性为99.8%,将编码人成熟PrP的基因定向克隆到 pET-30a(+)表达载体,将重组质粒pET-homPrP转化E.coli BL21(DE3),在37℃下用1.0 mmol/L IPTG诱导,重组融合蛋白获得高效表达,SDS-PAGE显示表达产物以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的20%~25%.用Ni-NTA 树脂亲和层析纯化了表达产物.Western-blotting分析表明,融合蛋白被抗PrP的单克隆抗体特异识别.因此,在大肠杆菌中表达的人成熟PrP融合蛋白可以作为制备PrP抗体的免疫原. 相似文献
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铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA),为革兰阴性菌,是医院内感染的主要条件病原菌之一。β-内酰胺类、氨基糖苷类和喹诺酮类抗菌药物是医院临床治疗PA感染的常用药,近年来随着新的抗药基因的不断出现,PA对这3类抗菌药物的抗药性普遍增加,甚至出现多药耐药(MDR)和泛耐药(PDR)菌株。除了对人类健康直接影响的医院及社区感染PA以外,该菌对毛皮动物如貂、狐狸和貉等危害严重,成为貂肠炎和出血性肺炎的主要病原菌,造成很大的经济损失。 相似文献
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大通量的抗生素药敏检测盒的设计及应用 总被引:2,自引:0,他引:2
基于琼脂稀释法,设计制作了96点阵抗生素药敏检测盒。以NCCLS(2007)抗生素最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)微量稀释法为对照,测定了分离自规模化猪场饲养员和幼儿园、中学学生的98株大肠杆菌对恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星和中药三黄汤的药物敏感性。结果表明,两种方法测定的最低杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC)、MIC都表现高度对称,其差值的平均值都在一倍稀释度内,在差值0.5 μg/mL范围内都达到90%以上的符合。MBC与MIC高度相关,r=0.94~0.99。这些指标说明两种方法测定的MBC与MIC平行性好。以总体的抗生素敏感性频率比较,两种方法测定值也很相近,符合率为93.93%。本检测盒还可以准确测定中药三黄汤对大肠杆菌的MIC(125~500 mg/mL)。96点阵抗生素药敏检测盒是适合于实验室进行大规模抗药性监测的新工具,具有简易、准确、快速、大通量、节约的优点。配合96孔培养板,一次可以测定96株病原菌对一种抗生素或中药的敏感性。 相似文献
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对发生渗出性皮炎(exudative epidermitis,EE)的病死仔猪进行病原学诊断,通过染色特性、生化试验、致病性试验及药敏试验,结合PCR方法对其16S rDNA基因序列分析进行鉴定。结果表明,病原为猪葡萄球菌和松鼠葡萄球菌混合感染,对小鼠均有致病性,且能从死亡小鼠上分离到相同病原菌。分离菌株混合培养物对头孢类等药物高度敏感,对氯霉素等药物中度敏感,对四环素和红霉素耐药。提示可使用敏感药物进行预防和治疗,注重平时的饲养管理和环境消毒是预防本病的重要措施。 相似文献
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日本沼虾DEAD-box家族基因vasa和PL10的克隆及其在卵巢发育过程中的表达 总被引:1,自引:1,他引:0
vasa和PL10同属于DEAD-box基因家族,具有依赖ATP的RNA解螺旋酶活性。本研究中,克隆了日本沼虾DEAD-box家族的两个成员,分别为vasa(Mnv-asa)和PL10(MnP-L10)。其中Mn-vasa全长2 408bp,包含1 803 bp的开放阅读框,编码601个氨基酸;Mn-PL10全长2 607 bp,包含2 127 bp的开放阅读框,编码709个氨基酸。成体组织的组织检测表明,Mnv-asa仅在性腺中表达,而Mn-PL10在性腺和其他器官中均有表达。Mn-vasa和MnP-L10在卵巢的原位杂交结果显示:Mn-PL10和Mnv-asa都在卵黄发生前期,卵黄发生期的早期和中期表达,而在卵黄积累末期不表达,但Mn-PL10在卵黄发生中期定位于卵母细胞的两端,而Mn-vasa则是均匀的分布在卵母细胞细胞质中。 相似文献
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中药对病原体杀灭及对肉鸡生产性能影响研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用中药复方提取液对H9N2亚型禽流感病毒、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏茼4种病原体进行体外杀灭试验,并进行肉鸡饲养试验,结果显示,该中药提取液按1:640稀释后对病毒的杀灭率仍然达到99%,提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌3种病原菌的MBC为2%-5%(稀释度,V/V),动物试验结果显示,该中药提取液能够显著提高肉鸡出栏均重(P〈0.05),与对照组相比,试验组单栋鸡舍利润平均增加1.585万元。结果表明,该中药提取液对预防疾病、提高肉鸡生产性能具有一定作用,值得推广应用。 相似文献