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在本实验室分离鉴定J亚群禽白血病病毒的基础上,用PCR方法扩增gp85基因,长度为921 bp的DNA片段,与J亚群禽白血病标准毒株序列比对同源率为96.4%。将该片段连接到pET28a表达载体上,构建了重组表达质粒pET28a-S1-Jgp85,对质粒测序后分析后,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析,表达出约为40 kD的融合蛋白。Western blot结果表明,表达产物可以与ALV-J阳性血清发生特异性反应。以纯化的His-Jgp85重组蛋白为包被抗原,建立间接ELISA方法,用于J亚群禽白血病的临床诊断。本研究对抗原包被浓度,待检血清稀释浓度,酶标抗体浓度,特异性试验及临界值等条件进行优化,对优化后的ELISA检测方法进行了临床应用试验。本研究建立了能特异性检测J亚群禽白血病血清抗体的ELISA方法。 相似文献
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J亚型禽白血病病毒的分离与鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究分别从广西的地方肉鸡及河北、辽宁的蛋鸡中分离到了3株禽白血病病毒.剖检疑似发病鸡只.采集病变的肝脏、脾脏组织,经过RT-PCR检测确定为ALV感染.将病变组织接种CEF细胞,连续传代2次,将细胞上清接种DF-1细胞,p27抗原检测为阳性.同时提取病毒基因组,用H5/ADI和H5/H7两对特异性引物进行PCR扩增,结果3株为ALV-J亚型.进一步设计ALV-J亚型gp85特异性引物进行PCR扩增并测序.结果确认分离到的3株病毒为ALV-J亚型.其gp85序列与标准毒株HPRS-103同源性为96%.同时,用p27单抗进行间接免疫荧光试验,测定毒力.综上所述,我们从广西地方肉鸡巾分离到1株J亚型禽白血病病毒,从河北及辽宁的蛋鸡中分离到2株J亚型禽白血病病毒. 相似文献
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试验随机选取1日龄地方鸡(原种鸡)115只,带翅号。于1、7、14、21、28、38、58、68、88、98、108、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、260、300日龄按号对应采泄殖腔棉拭子进行ELISA检测禽白血病病毒p27抗原。同时按号对应翅静脉采血分离血清进行ELISA检测A、B亚型抗体和J亚型抗体。260日龄时,对全群鸡只进行病毒分离。试验结果表明,全群鸡在监测的300日龄内均有ALV感染发生。其中p27抗原检出率在7日龄时达到最低值,为2.11%;在170日龄时达到最高峰,为32.18%。从38日龄到300日龄逐渐出现ALVA、B抗体阳性鸡只,阳性率在10%左右。260日龄时阳性率达到最高峰,为30.86%。260日龄病毒分离阳性率为29.49%(23/78),略高于棉拭子p27检出率20%(16/80),二者符合率为79.49%。J亚群抗体检测均为阴性。病毒感染与抗体变化没有直接相关性。 相似文献
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