牦牛EPF的原核表达及多克隆抗体制备     

曹艳桃  樊江峰  余四九  周应聪  杜培岩  李一娟  马进彪  赵生贤 《畜牧兽医学报》2022,53(2):470-480

本试验旨在制备牦牛早孕因子(early pregnancy factor,EPF)多克隆抗体,为牦牛妊娠早期高效快速诊断技术研究奠定基础.采用RT-PCR方法,从牦牛胎盘和卵巢组织中提取RNA,反转录为模板后进行EPF基因扩增,并将其克隆到改造后的载体pET28-His10-Sumo上,构建pET28-His10-Su...  相似文献   

牦牛卵泡发育过程中MST1和YAP1的表达特征研究     

李一娟  樊江峰  余四九  张晖  杜培岩  周应聪  钱文洁  姚颖 《中国畜牧杂志》2023,(7):126-131

哺乳动物STE20样激酶1(Mammalian Sterile 20-like Kinase 1,MST1)和Yes相关蛋白1(Yes AssociatedProtein1,YAP1)作为Hippo信号通路的主要成员，在哺乳动物胚胎发育、细胞增殖与凋亡、调节器官体积以及维持内环境的稳态等过程中发挥生理学效应。为探讨MST1和YAP1对牦牛卵泡发育产生的影响，本实验采集健康牦牛的卵巢，按照卵泡直径大小将其分为小卵泡（2～4 mm）、中卵泡（4～6 mm）、大卵泡（6～8 mm）和超大卵泡（>8 mm），采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western Blotting、免疫组织化学技术，对不同大小卵泡中MST1基因和YAP1基因及其蛋白表达情况进行分析研究。结果显示，MST1和YAP1基因及其蛋白在牦牛各个发育阶段卵泡中均有表达，其表达量在不同大小卵泡中存在一定差异。尤其处于优势化选择阶段时中卵泡的表达量显著高于其他3个期。YAP1在牦牛各发育阶段卵泡中的表达变化与MST1基本一致。从表达部位来看，MST1和YAP1蛋白主要分布于卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞中。结果表明，MST...  相似文献   

基于TMT技术的牦牛妊娠期血清蛋白质组学分析     

姚颖  周应聪  杜培岩  李一娟  钱文洁  李柳杨  余志鹏  崔燕  余四九  樊江峰 《畜牧兽医学报》2024,(1):192-206

为了探究妊娠期内牦牛血清的蛋白质组特征,筛选并分析差异表达蛋白质(DEPs)在牦牛妊娠维持中的作用。本研究选择9头4岁半至6岁龄健康状况良好且当年未产犊的自然发情母牦牛进行人工授精(AI)。在AI后第30、60及90天采集其血清样品,并对授配母牦牛进行妊娠诊断。依据诊断结果将采集的样品进行回顾性分组,即妊娠第1、2、3月组及未妊娠组(未妊娠组样品来自AI后90天经妊娠诊断确诊为未孕的牦牛个体),每组样品3个生物学重复。利用串联质谱标签(TMT)技术对牦牛血清样品的蛋白表达情况进行定量分析,筛选差异表达蛋白,并对其进行GO功能富集和KEGG通路等生物信息学分析,进一步筛选与牦牛妊娠维持相关的潜在蛋白。结果显示,在4组牦牛血清蛋白样品中共获得497个蛋白,以差异倍数≥1.2或≤0.83,且P<0.05为条件筛选,共筛选到68个差异蛋白。GO功能富集和KEGG通路分析显示,这些DEPs在代谢、免疫系统、粘附、生物调节等生物学过程以及补体与凝血级联、金黄色葡萄球菌感染等与炎症和免疫途径相关的通路有明显富集。值得注意的是,妊娠期各组间差异蛋白富集通路中均包含有PI3K-Akt、Rap1、M...  相似文献