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据NCBI上已发表的序列设计引物,通过RT—PCR从北京鸭脾脏的总RNA中扩增得到MHCⅡβ基因,将其克隆至pMD18-T载体上,经酶切分析及测序鉴定后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG中,转化大肠杆菌BL21中诱导表达。蛋白纯化后,免疫昆明小鼠制备多克隆抗体,经1：100倍稀释后用于Westernblot分析。结果表明：克隆得到了鸭MHCⅡβ链基因,大小为798bp,经核苷酸测序与已登录的基因序列同源性为92％;成功构建了原核表达载体,融合蛋白得到了高效表达且纯化后纯度达95％。制备的鼠抗鸭MHCⅡβ多克隆抗体,经酶联免疫吸附实验（ELISA）与免疫印迹法（Westernblot）证实抗体的效价高、特异性强,为深入研究鸭MHCⅡ奠定了基础。 相似文献
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鸡快慢羽分子鉴定方法的建立及其应用 总被引：1，自引：1，他引：0
利用找到的鸡快羽和慢羽基因,采用双重PCR方法建立了一种高效的鸡快、慢羽分子鉴定方法,在快慢羽自别雌雄鸡群体当中验证表明准确率达100%。采用该方法和经典表型鉴定方法对同一群鸡进行快慢羽判定,结果发现,除表型鉴定为微长型的个体与分子鉴定结果符合率为94.1%外,其它羽型符合率均达100%。对该鸡群快、慢羽个体早期生长速度比较研究发现,除出壳重差异不显著、第1周差异显著(P0.05),在其后各周,快、慢羽个体间体重差异均极显著(P0.01)。 相似文献
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根据NCBI上已发表的序列自行设计引物,通过RT-PCR从北京鸭脾脏的总RNA中扩增得到鸭MHCⅡα基因,将其克隆至pMD18-T,经酶切分析及序列测定鉴定后,进一步亚克隆至原核表达载体pET-28a.转化大肠杆菌BL21中诱导表达.电洗脱纯化蛋白,用于免疫昆明小鼠制备多克隆抗体.结果表明:克隆了鸭MHCⅡα基因,大小为633 bp,经核苷酸测序与已登录的基因序列同源性为99%;成功构建了原核表达载体,融合蛋白得到了高效表达且纯化后纯度可达90%,制备的鼠抗鸭MHCⅡα多克隆抗体经酶联免疫吸附试验(ELISA)与免疫印迹法(Western-blot)证实了抗体的效价高、特异性强,研究结果为研究鸭MHCⅡ分子奠定了基础. 相似文献
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