排序方式： 共有2条查询结果，搜索用时 0 毫秒
1
1.
采用逆转录-重组酶介导等温核酸扩增技术(RT-RAA)和成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)检测系统，建立一种快速、高灵敏度和高特异性的禽流感病毒(AIV)H5亚型核酸检测新方法。通过分析342条禽流感病毒H5亚型的HA基因序列，选取保守性区域设计具有强特异性的CRISPR RNA(crRNA)序列以及RT-RAA引物，并对检测体系中的主要成分LwaCas13a蛋白、crRNA、TaqMan探针、T7 RNA Polymerase、NTP Buffer Mix含量进行优化，建立了基于RT-RAA的AIV H5亚型核酸CRISPR-Cas13a检测方法。取105～1 copies·μL-1含有目的基因的质粒标准品和其他亚型禽流感病毒以及其他禽病病毒分别验证和评价该方法的灵敏性和特异性。结果表明，本文设计的RT-RAA引物与crRNA特异且灵敏，其最佳反应体系中主要成分用量分别为LwaCas13a蛋白(60μg·mL-1)2.0μL、crRNA(100μmol·L-1)3.2μL、TaqMan... 相似文献
2.
近年来，在全球范围内出现了EP402R基因（编码CD2v蛋白）缺失的ASFV突变毒株，因此需要开发一种检测方法来区分CD2v缺失的自然突变株和野生型ASFV毒株。对ASFV国内分离株WUHAN 2019-1株的EP402R基因序列，利用生物信息学分析其亲水性，选取可溶性较强部分（232～333 aa），根据大肠杆菌密码子偏嗜性对该段基因进行优化并人工合成，插入原核表达载体pET-28a进行低温表达，获得带有HIS标签的可溶性CD2v胞内区重组蛋白，将其命名为pET-28a-CD2v-IS，大小约15 ku。Western-blot鉴定结果显示，该重组蛋白抗原性良好。利用纯化后的CD2v重组蛋白建立了间接ELISA方法。经反应条件优化，最终确定最佳包被质量浓度为0.5μg/mL，封闭时间为1 h，样本最佳稀释度为1:10，样本最佳孵育时间为1 h，二抗最佳稀释度为1:20 000，最佳孵育时间为45 min，底物孵育最佳时间为5 min；确定建立的间接ELISA方法的S/N临界判定值为1.61。试验灵敏性可达1:1 280；批内变异系数小于4.15%，批间变异系数小于9.84%；只与AS... 相似文献
1