非洲猪瘟病毒A151R蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及鉴定     

李鹏昊  刘鹏  吴芃  梁严予  关洋  李向东  逄文强  田克恭 《中国动物传染病学报》2022,(2):142-146

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种高致死性传染病,对养猪业危害巨大.为了提供有效的抗原蛋白用于ASFV的临床诊断及免疫预防研究,本试验将ASFV SY18株A151R蛋白的基因序列进行密码子优化,并克隆至pET28a载体,双酶切验证得到大小分别为450 bp和5300 bp的片段,验证重组载体正确.重组载体...  相似文献   

非洲猪瘟病毒DP96R蛋白的表达与单克隆抗体的制备     

赵少若  王孟月  白晶晶  郝丽影  梁严予  关洋  邓均华  田克恭 《畜牧与兽医》2021,(2):77-81

为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)DP96R蛋白单克隆抗体,根据大肠杆菌密码子优化后的DP96R基因序列设计引物,PCR扩增后连接表达载体pET28a-SUMO构建pET-SUMO-DP96R原核表达质粒,将该质粒转化大肠杆菌BL21细胞,经IPTG诱导,获得可溶性的DP96R蛋白。通过Western blot鉴定该蛋白可与ASFV阳性血清发生特异性反应,表明其具有良好的反应原性。将纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠,共制备了14株针对DP96R蛋白的单克隆抗体。单克隆抗体重链亚类分别为IgG1、IgG2a,轻链亚类均为κ。采用DP96R蛋白为抗原的间接ELISA方法检测抗体的效价均不低于1∶2 560 000, 14株单克隆抗体均能够特异性识别DP96R蛋白。本试验为进一步研究DP96R蛋白生物学功能及ASFV基因缺失疫苗开发提供了重要的生物材料。  相似文献