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ffar-1在胰腺组织和神经系统中均有着重要作用,但其作用机制,尤其是在神经系统中的机制仍不清楚.以牛ffar-1基因为研究对象,通过生物信息学预测并分析该基因的核心启动子区域,利用5'RACR技术扩增牛ffar-1基因mRNA 5'UTR区域,同时构建牛ffar-1基因真核表达载体并在真核细胞中进行表达.生物信息学分析表明,牛ffar-1基因核心启动子属于TATA-less,Int-DPE类型；5'RACE结果将牛ffar-1基因mRNA序列向上游推进了726 bp;成功构建了牛ffar-1真核表达载体pIRES-EGFP-bffar-1,并在真核细胞中进行了表达.从启动子序列、mRNA 5'UTR及真核细胞表达3个方面对牛ffar-1基因进行了初步研究,为该基因功能及调控的相关研究提供理论和试验依据. 相似文献
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旨在优化奶牛的手工体细胞克隆技术方案,本试验以牛卵母细胞为材料研究了2个半卵不同粘合交流电压、重构胚不同激活方法和不同的COCs采集方法对奶牛手工体细胞克隆胚发育的影响.结果表明,(1)降低2个半卵粘合交流电压能显著提高其随后的卵母细胞融合率(P<0.05);(2)A23187+6-DMAP组激活的无透明带重构胚分裂率和囊胚率显著高于Ionomycin+6-DMAP组(P<0.05);(3)真空蠕动泵抽吸法和刀片切割法获得的卵母细胞总数显著高于注射器抽吸法(P<0.05),而切割法获得的1和2级卵母细胞百分数显著高于其它2种方法(P<0.05).因此,采用真空蠕动泵抽吸法获得COCs,用较低的粘合交流电压进行半卵粘合,采用A23187+6-DMAP激活法进行融合后的激活能显著提高奶牛手工体细胞克隆效率. 相似文献
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本研究以中国斗鸡λ噬菌体cDNA文库为模板,克隆了DJ-1基因,并构建了pGEX-4T-1-DJ-1原核表达载体和pEGFP-N3-DJ-1真核表达载体,前者用来研究DJ-1蛋白在大肠杆菌表达系统中的优化表达;后者用来转染成纤维细胞系,研究DJ-1蛋白的亚细胞定位和建立转DJ-1基因的细胞模型。试验成功克隆了DJ-1基因的CDS区,并将其定向插入到pGEX-4T-1原核表达载体和pEGFP-N3真核表达载体中。IPTG浓度梯度诱导原核表达结果显示,在0.8mmol/L时DJ-1蛋白表达量最高;时间梯度结果显示,在8h时DJ-1蛋白表达量最高;真核表达载体转染脂尾羊成纤维细胞后48h阳性率最高,DJ-1蛋白在细胞核和胞质中均有表达,但胞质中居多。上述结果表明,本试验已经建立了稳定的DJ-1蛋白的真核、原核优化的表达系统,为进一步研究DJ-1基因的功能奠定了基础。 相似文献
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