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本试验旨在运用分子生物学与生物信息学方法对布鲁氏菌DnaJ蛋白进行分析;将该蛋白进行原核表达,并检验纯化蛋白在体外或体内诱导Th1和Th2型免疫反应的能力。以布鲁氏菌M5-90为模板成功扩增目的基因DnaJ,构建重组表达载体pET-30a-DnaJ;利用SDS-PAGE检测DnaJ重组蛋白在大肠杆菌中的表达,并对其进行纯化;用DnaJ蛋白刺激RAW 264.7细胞和小鼠脾细胞,并用DnaJ蛋白免疫小鼠;利用ELISA试剂盒检测细胞因子IFN-γ、IL-4及小鼠血清中IgG1和IgG2a抗体水平的变化。结果显示,DnaJ蛋白二级结构以无规则卷曲结构为主,该蛋白有11个抗原决定簇;SDS-PAGE结果显示,重组菌在37.7 kDa大小的位置有特异表达条带,获得了DnaJ纯化蛋白;DnaJ蛋白可诱导宿主细胞和小鼠产生高水平IFN-γ、IL-4、IgG1和IgG2a抗体。鉴于DnaJ蛋白可在体外或体内诱导Th1和Th2型免疫反应,有望成为布鲁氏菌病的候选亚单位疫苗。 相似文献
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将180尾、体质量为(32.81±1.28) g的杂交鲟幼鱼随机均分为4组，分别投喂藤茶粉添加水平为0.00%(A0)，0.50%(A1)、1.00%(A2)、2.00%(A3)的试验饲料，试验共进行60 d，每组3个重复，每个重复15尾鱼，试验结束后，检测杂交鲟的生长性能、血清生化指标和免疫指标、肠道形态指标、消化酶活性和微生物多样性、肌肉组分含量和氨基酸组成。结果表明：与A0相比，A1和A2杂交鲟的终质量、增重率、特定生长率和成活率均无显著变化，A3的终质量、增重率和特定生长率均显著降低；A1的总胆固醇、甘油三酯、白蛋白含量及谷草转氨酶活性均显著升高，A2和A3的谷草转氨酶活性均显著降低；各试验组的血清碱性磷酸酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活性和总抗氧化能力及肠道蛋白酶、淀粉酶活性均显著升高，A2的脂肪酶活性显著升高，A1的脂肪酶活性显著降低；A1和A2的肠道皱襞高度显著升高；A2的肠道菌群的物种多样性增加；各试验组的肌肉常规成分均无显著变化；A2和A3肌肉的必需氨基酸占总氨基酸的比值显著升高。可见，本研究条件下，适量添加藤茶粉可提高杂交鲟的免疫水平而不影响其生长，添加量以1.00%为宜。 相似文献
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