乙型脑炎病毒EⅢ基因片段的表达与EⅢ-间接ELISA抗体检测试剂盒的研制     

姚俊庸  毛晶丹  郑仲华  赵明秋  陈金顶 《广东畜牧兽医科技》2016,(5)

为了研制乙型脑炎病毒EⅢ-间接ELISA抗体检测试剂盒,将乙型脑炎病毒EⅢ基因克隆至原核表达载体p ET-32a(+),重组质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达。以纯化后的重组蛋白EⅢ包被酶标板,优化ELISA反应条件,组装试剂盒。SDS-PAGE和Western bloting分析表明,重组蛋白分子质量约为30ku,经IPTG诱导后高效表达,且具有来良好的免疫原性。优化试验确定重组抗原最佳包被浓度为4.7μg/m L,血清样本的阳性临界值为0.255。特异性试验结果表明,重组蛋白与猪瘟、猪伪狂犬、猪圆环病等多种病原体的阳性血清无交叉反应。敏感性试验结果表明,血清稀释至1∶6400时仍检测为阳性。该试剂盒的批内、批间变异系数均小于10%。用该试剂盒检测224份临床猪血清样本,并与商品化ELISA试剂盒检测结果比较,两者的符合率为90.7%。研究结果表明,原核表达的猪流行性乙型脑炎病毒EⅢ蛋白具有良好的免疫原性,研制的猪流行性乙型脑炎病毒EⅢ-间接ELISA抗体检测试剂盒敏感性、特异性和重复性较好,为猪流行性乙型脑炎的抗体水平检测、流行病学调查、类症鉴别等方面提供了重要方法。  相似文献   

猪瘟病毒C株截短E2基因在大肠杆菌中表达及免疫原性初步检测     

郑仲华  李东升  姚俊庸  常艳  勾红潮  刘文俊  赵明秋  毛晶丹  陈金顶 《中国畜牧兽医》2014,41(5):12-16

本试验利用PCR技术,扩增得到猪瘟病毒（CSFV）C株E2基因的主要抗原片段A/D区549 bp,将其酶切纯化后,与已酶切纯化的pET-32a进行16 ℃过夜连接,转化大肠杆菌BL21。从转化成功的氨苄培养板挑取合适菌落进行PCR,挑取目的条带正确的菌落加至LB培养基进行过夜培养后送测序。将测序正确的菌液划板,挑菌培养并用IPTG进行诱导表达。得到的蛋白进行SDS-PAGE,在约39 ku位置有蛋白条带。将蛋白纯化后,分别利用自制兔抗CSFV阳性血清及临床检测阳性的猪抗CSFV阳性血清进行Western blotting检测,可见在39 ku处有单一条带,表明表达的蛋白具有免疫原性。本试验结果为下一步ELSIA试剂盒的组装奠定基础,方便对猪场免疫猪群猪瘟抗体水平进行监控。  相似文献   

羊呼吸系统疾病的防治     

毛晶丹  袁颜方  王鹏芳 《吉林畜牧兽医》2023,(9):81-82

在养殖羊的过程中,其呼吸系统疾病是常见的疾病之一,主要症状表现为肺炎、鼻炎、支气管炎等,影响羊的健康生长,给养殖户带来严重的经济损失,所以养殖户需要及时发现尽快诊治。本文对羊呼吸系统疾病的发病原因与临床症状进行了分析,提出了治疗羊呼吸系统疾病的方法,使羊群尽早恢复健康。  相似文献