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褪黑激素RIA方法的建立及其在探索湖羊四季发情机理上的应用 总被引:2,自引:1,他引:1
运用Mannich的反应,将褪黑激素(MLT)与牛血清白蛋白(BSA)连结,制备MLT完全抗原。MLT与BSA连结比为12:1。将此完全抗原免疫5只雄兔,制备特异性抗体;将MLT用^125I标记,薄层层析筛选标记物,制备高纯度的放射性标记物,建立竞争性MLT-RIA法。本法可测范围为15.31-1500pg,灵敏度为每管15.31pg,批内变异系数6.7%,批间变异系数14.8%。用此法测定夏至时考力代羊昼夜血样,测定结果与国外基本一致;测定夏至时湖羊昼夜血样,发现湖羊MLT分泌有其特殊性,即血液MLT水平呈明显的昼夜变化;白天为100ng/L左右,而黑暗开始时,MLT水平迅速上升,在20:00-次日8:00处于高水平,最大值为1100ng/L左右。 相似文献
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用剪切及剪切加胰蛋白酶法消化兔泪腺组织。获取兔泪腺上皮细胞,设计相应的培养基,进行组织块原代培养或混合消化原代培养,用免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。结果表明。组织块在体外培养10d,可见上皮样细胞从植块边缘长出,2周后泪腺上皮细胞在培养瓶底部铺成单层,经传代3次,角蛋白染色阳性细胞纯度达90%以上;用混合消化法接种的细胞生长相对较慢。结果提示:用剪切组织块进行培养的方法简便易行,易获得符合要求的兔泪腺上皮细胞。 相似文献
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