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鸭肠炎病毒核衣壳蛋白质互作蛋白质基因荧光定量PCR检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
为进一步阐明鸭肠炎病毒(DEV)的致病机理,本试验建立检测鸭肠炎病毒核衣壳蛋白质(NP)的互作蛋白质(PKCI)基因荧光定量PCR方法。针对PKCI基因设计特异性引物,经PCR扩增目的基因构建重组质粒p MD18-T-PKCI,将其作为阳性标准品构建荧光定量PCR标准曲线,并对建立的荧光定量PCR方法进行重复性、特异性和敏感性试验。结果显示:标准曲线的线性关系为Y=-3.31x+42.00,相关系数为-1.00,扩增效率为100%,熔解曲线仅出现单特异峰,对H5亚型、H7亚型和H9亚型禽流感病毒及新城疫病毒、鸭肝炎病毒均未检测到荧光信号。表明本试验建立的方法具有良好的稳定性、特异性和灵敏性。 相似文献
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为探讨山羊流产嗜衣原体重组真核质粒进入临床试验的可行性,本试验用PCR方法扩增出山羊流产嗜衣原体OmpA基因,克隆至真核表达载体pcDNA3.1（+）中,经PCR和双酶切鉴定后,将重组质粒pcDNA3.1-OmpA转染至PK-15细胞,观察目的基因表达情况,并将制备的大肠杆菌基因组单链DNA作为分子佐剂与重组质粒共同免疫小鼠,检测重组质粒在小鼠体内分布情况及血清抗体水平。结果表明,经PCR、双酶切和测序鉴定表明成功构建重组质粒pcDNA3.1-OmpA;转染PK-15细胞后,荧光抗体试验结果证实重组质粒pcDNA3.1-OmpA得到有效表达。首免后14 d,重组质粒加分子佐剂组的抗体效价显著高于重组质粒组和灭活疫苗组（P<0.05）;随着免疫次数增加和时间推移,免疫小鼠抗体水平均呈现上升趋势,至35 d时达到最高峰,此后抗体滴度逐渐下降,但仍维持较高水平。首免后21 d,在小鼠心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、脑、空肠和腿肌中均可检测到质粒的分布,此后逐渐消失,49 d在所检组织中均未检测到重组质粒的存在。表明试验成功构建了基于OmpA基因的山羊流产嗜衣原体重组真核质粒,且加入分子佐剂后可诱导小鼠产生较高水平的血清抗体。 相似文献
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随着畜禽粪便污染防治工作向纵深推进,畜禽规模养殖场的粪污治理及监管模式日渐成熟,而规模以下养殖场（户）的畜禽粪便污染问题逐渐成为畜牧领域生态环境保护的焦点,如何同步将规模下畜禽粪便污染防治工作做好,是摆在大家面前的难题,也是制约我国畜禽粪污资源化综合利用率的关键因素。规模以下粪便污染治理为何难以推动,制约因素是什么,行业管理部门该怎么做,养殖场（户）该怎么做,本文对这些问题进行了分析,提出了一些可行性建议,供参考。 相似文献
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为了解连续免疫压力下猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的变异规律,以及为猪繁殖与呼吸综合征病的防控提供科学依据,以贵州分离株 PRRSV AS 为研究对象,监测分析了 PRRSV 接种免疫猪群后其主要基因变异情况。结果表明：1）接种 PRRSV 后,免疫猪只未发生死亡现象,但出现轻微的临床表现和病理变化,且能在病变组织中分离到 PRRSV,并扩增出与预期大小相一致的 Nsp2和 GP5基因条带;2）对Nsp2基因,两次分离物 PRRSV AS-a、PRRSV AS-b 与原始病毒 PRRSV AS 的遗传距离相应为0．018和0．064,呈加速渐远趋势;PRRSV AS-a 发生16处点突变,其中9处为非同义突变,7处为同义突变;PRRSV AS-b 发生25处点突变,其中非同义突变12处,同义突变13处;从 PRRSV AS 向 PRRSV AS-a 到PRRSV AS-b 演变过程中,Nsp2基因编码蛋白第285～293位抗原指数发生不同程度改变,且演变趋势呈正向选择作用;3）对 GP5基因,两次分离物 PRRSV AS-a、PRRSV AS-b 与原始病毒 PRRSV AS 的遗传距离相应为0．004和0．015,变异趋势不明显;PRRSV AS-a 发生2处点突变,非同义突变和同义突变各1处;PRRSV AS-b 发生3处点突变,其中非同义突变2处,同义突变1处;从 PRRSV AS 向 PRRSV AS-a 到PRRSV AS-b 演变过程中,GP5基因编码蛋白重要抗原表位未发生改变,但其演变呈正向选择作用。说明,在连续免疫压力下 PRRSV 容易发生变异。 相似文献
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贵州省羊口疮的调查研究 总被引：2，自引：0，他引：2
对贵州省的5个养羊大县羊只发生的羊口疮进行了确诊。流行病学调查显示,任何年龄的黑马羊、沿河黑山羊、麻江黄羊和波尔山羊均可感染羊口疮,发病率为2.2%～17.7%。病死率为0～51.4%;发病部位可分为唇形、乳房型、外阴型和混合型,其中以唇形较为常见;患病皮肤在光学显微镜下可见细胞发生"气球样变";电子显微镜观察到卵圆形的线团样病毒粒子;PCR扩增出507bp的特异性条带。通过流行病学调查、临床症状、病理剖检变化可对该病作出初步诊断,经病理组织切片镜检、电镜负染和PCR方法确诊为羊口疮。 相似文献
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