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为观察咖啡因间歇刺激是否减轻环孢素A所致的细胞毒性及对骨骼肌细胞的泛素-蛋白酶体途径和钙蛋白酶活性的影响,将分化的L6肌管细胞分为4组,即对照组、咖啡因组、环孢素A组和咖啡因+环孢素A组。咖啡因(5mmol/L)和环孢素A(10μmol/L)每天刺激5h,连续刺激5d,然后收集细胞。荧光实时定量PCR检测FoxO1、MAFbx、MuRF1基因表达;Western blot法检测FoxO1、MAFbx、MuRF1和20S蛋白含量;荧光定量法检测20S蛋白酶和钙蛋白酶的体外活性。结果表明,加环孢素A的两组细胞大小明显小于另外两组,且咖啡因间歇刺激可以减轻环孢素A诱导的肌管细胞萎缩;间歇刺激下,加咖啡因的两组FoxO1mRNA表达下调;MuRF1和MAFbx两个基因的表达在各组之间无差异,且咖啡因和环孢素A对FoxO1/MuRF1/MAFbx和20S蛋白酶体蛋白含量皆无主效应。荧光定量检测蛋白酶活性结果显示,咖啡因和环孢素A不影响20S蛋白酶体的活性,但对钙蛋白酶体外活性有交互影响。环孢素组钙蛋白酶体外活性低于正常组;环孢素A+咖啡因组低于咖啡因组,但高于环孢素组。说明咖啡因间歇刺激可减轻环孢素A所致的肌管萎缩,且咖啡因间歇刺激改可善环孢素A抑制的钙蛋白酶体外活性。 相似文献
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