禽肠炎沙门菌外膜蛋白OMPX基因的克隆及其在乳酸乳球菌中的表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈金龙  王希辉  王婷婷  胡敬东  赵宏坤  许瑞利 《中国兽医学报》2011,31(4)

以禽肠炎沙门菌基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增得到外膜蛋白OMPX基因片段,并将其克隆到乳酸乳球菌表达载体pMG36e中,构建重组质粒pMG36e-OMPX。将重组质粒电转入乳酸乳球菌MG1614,得到重组基因工程乳酸乳球菌,在GM17培养基中培养12h后,经SDS-PAGE分析显示表达的蛋白约为16 000,与预期相符,经Western-blot检测表明,表达的蛋白具有良好的反应特异性。  相似文献   

有效检测发酵豆粕中抗原蛋白的新方法     

王寅  王希辉  张克顺 《饲料工业》2013,(6):52-55

为有效检测发酵豆粕中的抗原蛋白水平,试验选择0.6%的KOH来破坏发酵豆粕因干燥形成的蛋白质变性表层,有效释放可溶性蛋白,使用Gelanalyzer软件对其SDS-PAGE电泳图进行蛋白质条带分析,从而得出抗原蛋白所占可溶性蛋白比例及其降解程度。  相似文献   

O型FMDV VP1基因与山羊IL-18基因在昆虫细胞中的共表达与活性检测     

王婷婷  范忠玲  王希辉  陈金龙  曹丙蕾  孔娜  胡敬东  赵宏坤 《中国兽医学报》2011,31(2)

以杆状病毒pFastBacTM Dual为载体,将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因和山羊白介素18(gIL-18)基因,分别插入到双表达载体的P10启动子和多角体蛋白启动子PH的下游,构建重组质粒pFastBacTMDual-gIL18-VP1,然后转化DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-gIL18-VP1,并利用昆虫细胞进行转染。间接免疫荧光试验(IFA)检测表明gIL-18基因和VP1基因同时在同一细胞中独立表达。将共表达产物进行生物学活性分析表明,重组蛋白能够诱导山羊脾淋巴细胞生成IFN-γ抑制水疱性口炎病毒(VSV)在牛肾细胞(MDBK)上生长。本试验用Bac-to-Bac系统成功构建了同时含有gIL-18基因和VP1基因的重组杆状病毒,并在昆虫细胞中得到了高效表达,且具有良好的生物学活性,从而为下一步研究gIL-18在口蹄疫(FMD)中的免疫调节作用奠定了坚实的基础。  相似文献   

多重RT-PCR检测PRRSV和CSFV及PRRSV ORF5基因遗传变异分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

张金强  吴家强  孟斌  郭文龙  王希辉  李坤  于江  刘少宁  张玉玉  王金宝 《中国兽医学报》2011,31(5)

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)的基因组序列设计了2对特异性引物,建立了同时检测PRRSV和CSFV的多重RT-PCR方法.2008年1月至2009年12月期间,采集山东各地71个不同规模猪场及农村散养户212份病料,采用建立的多重RT-PCR技术同时检测PRRSV和CSFV的感染状况.检测结果显示,病料中高致病性PRRSV占57.1%(121/212),CSFV占29.2%(62/212).应用RT-PCR方法扩增山东不同地区16株PRRSV的ORF5基因,并进行了序列分析.结果表明,16株PRRSV的ORF5基因核苷酸同源性为97.0%～100.0%;与参考变异毒株JXA1、传统毒株VR2332核苷酸同源性分别为98.0%～99.5%和86.4%～87.7%.推导的氨基酸序列分析表明,16株毒株GP5蛋白氨基酸不存在缺失,但存在位点突变.12株在非中和表位29位点与准种进化34位点发生了突变,分别由V→A和N→S;1株在非中和表位185位点发生突变,由A→V;这与2007年流行的PRRSV毒株JXA1、HUN等不同.  相似文献