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为研究醋酸钙不动杆菌的致病机制及防控措施,对疑似患有醋酸钙不动杆菌的病死牛肺脏组织进行病原分离,得到了1株优势菌命名为9-1。对分离菌株进行形态学观察、生化试验、16S rDNA基因序列测定,动物致病性试验和药敏试验。结果显示,分离菌株为革兰阴性杆菌且对试验小鼠具有较强的致病性,经生化试验和16S r DNA基因序列测定分析确定为醋酸钙不动杆菌。药敏试验结果显示该分离菌株对氟苯尼考、头孢噻肟、头孢氨苄、阿奇霉素耐药,对其余8种测试药物敏感。经β-内酰胺类(TEM、DHA、OXA-23、OXA-58)耐药基因检测结果显示均为阴性。为醋酸钙不动杆菌引起的疾病选择合理的抗菌药物提供了一定科学依据,并为进一步研究其耐药机制奠定了基础。 相似文献
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为建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)抗体间接ELISA检测方法,利用马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)介导的植物生物反应器在本氏烟草中表达ASFV p30蛋白,并以表达的蛋白作为包被抗原,对间接ELISA各反应条件进行优化。依据ASFV SY-18株的CP204L(p30)基因序列,按照本氏烟草密码子的偏好性,对p30基因(231～536 bp)的核苷酸序列进行优化、人工合成及克隆,通过In-Fusion连接技术将扩增的p30基因插入到PVY基因组的P1和HC-Pro基因之间,构建PVY-p30重组病毒质粒,以摩擦的方式将质粒接种本氏烟草叶片,14 d后,通过RT-PCR和Western blot分析目的基因的转录和重组蛋白的表达情况,并利用Ni-NTA-琼脂糖亲和层析柱纯化本氏烟草中表达的p30重组蛋白,Western blot分析p30重组蛋白的纯化效果和反应原性,将纯化后的p30重组蛋白作为包被抗原,建立ASFV抗体间接ELISA检测方法。结果显示,构建的PVY-p30重组病毒能够系统性侵染本氏烟草;p30重组... 相似文献
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目前我国的病死畜禽无害化处理还存在着法律法规及执法体系有待健全、养殖户重视程度不够、无害化处理方式存在安全隐患、无害化处理设施及设备落后、二次污染严重,威胁公共安全等问题。文章全面分析了当前病死畜禽处理的现状,阐述了目前针对病死畜禽的五种常用处理技术,提出了建立健全小规模及规模以下养殖场无害化处理设施设备;完善病死畜禽集中无害化处理体系;开发新型、环保的无害化处理方式;资金补贴机制到位;落实宣传培训工作等建议,以期为完善无害化处理机制,进而保障食品安全及公共健康提供理论依据。 相似文献
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为了建立检测绵羊流产衣原体MOMP(main outer membrane protein)蛋白抗体的间接ELISA方法,试验将编码MOMP蛋白的基因序列经密码子优化后进行基因合成,并克隆和原核表达截短蛋白,以该蛋白为抗原建立绵羊流产衣原体抗体的间接ELISA方法,优化该方法的反应条件,同时验证其特异性、敏感性和重复性,最后用该方法对临床待检羊血清进行检测,并与间接血凝试验试剂盒的检测结果进行比较。结果表明：截短蛋白MOMP201～390的表达、纯化效果最好。经探索,优化后的间接ELISA方法最优反应条件：抗原包被浓度为1 mg/L,37℃包被2 h,待检血清最佳稀释度为1∶100,血清和酶标二抗的最佳作用时间分别为45 min、60 min。建立的间接ELISA方法的敏感性较高,特异性和重复性较好,使用该方法从209份临床待检羊血清样本中检出47份阳性血清,与间接血凝试验试剂盒分别检测临床待检羊血清样本86份,总符合率为80.23%。说明基于截短蛋白MOMP201～390建立的绵羊流产衣原体抗体间接ELISA方法可用于绵羊流产衣原体临床血清... 相似文献
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为研究牛多杀性巴氏杆菌(P.multocida)高亲和力锌吸收蛋白znuA的免疫学活性及其免疫保护作用,本研究利用PCR方法扩增了P.multocida znuA基因,构建表达载体pET-28a-znuA,将其转化E.coli BL21后经诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和western blot分析显示,重组蛋白约40 ku;以重组znuA蛋白免疫小鼠后用P.multocida菌株Y-1攻毒,结果显示重组znuA蛋白对免疫组小鼠保护率为60%,表明其具有免疫保护作用。本研究首次在原核系统中表达了P.multocida znuA蛋白,且验证了其免疫保护力,为深入探究znuA基因在P.multocida致病过程中的作用及其亚单位疫苗的开发奠定了基础。 相似文献
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为建立绵羊鹦鹉热衣原体(Cp)间接ELISA抗体检测方法，本实验将编码Cp主要外膜蛋白MOMP的omp A基因序列按大肠杆菌密码子偏好性优化后，合成质粒p ET-28b (+)-omp A，另外设计特异性引物，分别将omp A截短克隆至p ET-28b(+)载体中构建重组表达质粒p ET-28b(+)-omp A1-182和p ET-28b(+)-omp A183-390，测序鉴定正确后分别转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中，经IPTG诱导并纯化后，经western blot鉴定3个重组蛋白，结果显示，重组MOMP183-390蛋白(r MOMP183-390)表达效果最好。以r MOMP183-390作为包被抗原，采用方阵滴定法优化各反应条件，初步建立了检测Cp抗体的间接ELISA方法。采用建立的该方法检测羊痘病毒、布鲁氏菌、羊口疮病毒、小反刍兽疫病毒、口蹄疫病毒等羊临床常见病的阳性羊血清，结果显示，除Cp外，该方法与其他阳性羊血清均无交叉反应，特异性强；将C... 相似文献
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