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克隆猪热休克蛋白40 (heat shock protein 40,Hsp40)基因并构建其原核表达载体,以纯化的猪Hsp40蛋白为抗原免疫兔制备抗猪Hsp40多克隆抗体。参照GenBank收录的猪Hsp40全基因序列,设计1对特异性扩增其CDS区全序列的引物,利用RT-PCR方法扩增猪Hsp40基因;扩增产物经双酶切后定向克隆至原核表达载体pCzn1-His,测序无误后转化Arctic Express (DE3) RP感受态高效表达宿主菌,优化其表达条件(时间、IPTG浓度、温度)后,将可溶性的猪Hsp40重组蛋白用His-Band Ni^+层析柱进行纯化,用纯化的His-Hsp40重组蛋白免疫兔以制备多克隆抗体。采用抗原亲和纯化法对制备的多抗进行纯化,并采用间接ELISA法检测抗体效价。利用Western blot检测重组蛋白的免疫原性和反应原性,以及抗体的特异性。结果显示,克隆得到的猪Hsp40基因片段长度为1 485 bp,表达出的可溶性His-Hsp40重组蛋白相对分子质量约为57 800,制备出的猪Hsp40蛋白多克隆抗体效价为1∶512 000,且该多抗能够特异性识别His-Hsp40重组蛋白和猪肺泡巨噬细胞中的Hsp40蛋白。结果表明,成功克隆了猪Hsp40基因,表达并纯化了猪Hsp40蛋白,制备的兔抗猪Hsp40蛋白多克隆抗体能够有效地应用于猪Hsp40蛋白抗原的检测。 相似文献
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试验旨在研究苦木根、茎、枝、叶4个不同药用部位的体外抗氧化活性。试验采用DPPH法、ABTS法和普鲁士蓝法测定苦木根、茎、枝、叶4个不同药用部位体外抗氧化能力。结果显示：苦木4个药用部位均具有较好的体外抗氧化能力,苦木叶的抗氧化活性最强。在ABTS法抗氧化评价中,苦木叶的活性显著高于对照组VC(P<0.05),呈现极强的抗氧化能力。苦木茎对DPPH、ABTS自由基清除能力优于根,根与茎对铁离子的还原能力相当,苦木枝的抗氧化活性最弱。研究表明,苦木不同入药部位的体外抗氧化活性存在差异,均可以作为动物生产的抗氧化应激剂使用。 相似文献
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为对复方柴胡饲料添加剂的提取工艺进行优化,采用单因素结合正交试验,考察乙醇浓度、回流时间、溶剂倍量对柴胡皂苷转移率的影响,优选复方柴胡的提取条件。结果表明：影响柴胡皂苷的因素大小为回流时间>乙醇浓度>溶剂倍量。结合工业生产成本,确定较优提取工艺为乙醇浓度 80%,回流时间 60 min,溶剂倍量15倍,此条件下柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的转移率分别为68.72%、20.05%。此提取工艺稳定、可行,为复方柴胡饲料添加剂在畜牧业的应用提供依据。
[关键词] 柴胡|正交试验|提取|中草药饲料添加剂 相似文献
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