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为制备抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)Erns蛋白单克隆抗体,本试验用Erns重组蛋白免疫Balb/c鼠,刺激小鼠脾脏产生特异性免疫细胞;通过化学剂诱导剂PEG-4000诱导免疫细胞和骨髓瘤细胞融合,形成杂交瘤细胞;间接ELISA方法结合亚克隆方法筛选阳性细胞孔;鉴定为稳定分泌抗体的细胞株做扩大培养,细胞悬液计数并无菌注... 相似文献
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脑红蛋白（neuroglobin，NGB）和缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）是存在于脊椎动物神经系统中的两种关键性神经保护因子，在低氧适应过程中具有重要的生理功能。为探究牦牛（Bos grunniens）脑组织中对机体运动、呼吸、感觉等生理活动起重要调节作用的后脑在适应低氧过程中NGB和HIF-1α的表达与分布关系，本研究利用RT-qPCR、Western blot及免疫组织化学技术，对NGB和HIF-1α在牦牛后脑不同区域的表达与定位特征进行了研究。RT-qPCR和Western blot结果显示，牦牛后脑中，NGB和HIF-1α基因与蛋白表达趋势基本一致，在小脑蚓前叶中的表达量最高，并显著高于延髓、脑桥及小脑其他部位（P<0.05），小脑半球皮质次之（P<0.05），蚓小叶表达量最低，其他不同区域间两种因子的表达量也存在一定差异。免疫组化结果显示，NGB和HIF-1α阳性产物分布特征相似，且HIF-1α蛋白免疫阳性反应的整体强度高于NGB蛋白。各区域NGB和HIF-1α主要散在表达于特定层次的神经元胞质中，如延髓、脑桥神经元，小脑半球、蚓部皮质分子层、浦肯野细胞层及颗粒层神经元等。小脑半球髓质区的神经胶质细胞内也见有少量NGB和HIF-1α阳性表达，阴性对照均无表达。上述结果提示，牦牛后脑不同区域NGB和HIF-1α的表达在长期适应低氧环境过程中存在一定的选择性差异，蚓前叶对缺氧具有较高的耐受性，小脑半球皮质次之，蚓小叶的缺氧耐受性最弱，这种差异的产生可能与后脑相关区域承担的特定功能有关联，但其具体机制尚有待进一步探讨。各区域低氧适应性功能的发挥主要依赖其特定的神经元结构。 相似文献
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