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为了研究卡那霉素抗性(KanR)基因能否在哺乳动物细胞中表达以及用含相同抗性基因重组质粒防治奶牛乳腺炎的安全性,用PCR从重组质粒p215C3LYZ中扩增得KanR基因,将其克隆入原核表达载体pQE-31,用含卡那霉素(Kan)琼脂平板筛选得KanR重组菌,经IPTG诱导成功表达了预期大小的Kan抗性融合蛋白;用纯化的重组蛋白免疫小鼠,获得了Kan抗性蛋白抗血清,经Western blotting证明免疫血清特异性良好;分别用重组质粒pQE-Kan和p215C3LYZ转染COS-1细胞,在不含抗生素培养液中培养后分别收集细胞上清和细胞裂解物;将转染细胞上清分为添加和不加Kan组,接种Kan敏感菌DH5α大肠杆菌,培养物的OD600检测结果显示,添加组的指示菌生长被抑制,转染细胞上清中无Kan抗性蛋白表达;以Kan抗性蛋白免疫血清进行的Western blotting结果显示,转染细胞内无Kan抗性蛋白表达;将p215C3LYZ注射奶牛乳腺,用脱脂和浓缩奶样进行Western blotting检测,结果显示试验牛乳中也无Kan抗性蛋白表达。这些试验结果提示,来源于原核大肠杆菌的KanR基因启动子在动物细胞中无转录活性,乳腺注射含KanR基因的重组质粒不会表达对奶牛和人体有害的Kan抗性蛋白。 相似文献
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动物免疫效果的影响因素与提高措施 总被引：2，自引：0，他引：2
近年来,中央和地方各级政府高度重视防疫工作,重大动物疫病防控疫苗由政府买单、发放村级防治员注射补助及通过扩大内需项目加强基层畜牧兽医站的基础设施与能力建设等措施,大大地提高了动物防疫水平。但动物免疫效果的体现是一个综合的、系统性的工程,受到多种因素的制约与影响。 相似文献
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正兽医工作涉及社会公共安全(重大动物疫病、人畜共患病等)、畜产品质量安全等与市民生活息息相关。力保兽医工作不出或少出问题,就要求我们依法行政,创新方法,依法监管。开展飞行检查,也是依法监管的一种有效形式。下面结合我们的实际工作,简要谈谈飞行检查在兽医工作中的应用。一、飞行检查在兽医工作中的应用意义飞行检查最早应用在体育比赛中对运动员兴奋剂的检查。也就是在非比赛期间进行的不事先通知的突击性兴奋剂抽检。在当前情况下,兽医工作特别是畜产品质量安全,如"瘦肉精"监管等成为高危环节。开展飞行检查,在被检查单位不知情的情况下,可以真实了解被监管单位安全监管情况,发现需要改进的问题,可以说是行动快、效果好的办法。 相似文献
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