猪细小病毒SYBR Green I模式实时定量PCR检测方法的建立     

叶盛权  肖性龙  吴晖  郭祀远  余以刚  吴斌  贾赟 《中国动物检疫》2009,26(6)

根据GenBank猪细小病毒（PPV）的NS1基因序列，设计一对特异性引物，采用SYBRGreenI随机结合渗入法，建立实时定量PCR检测方法，构建了检测PPV的标准DNA模版，循环阈值（Ct）与标准质粒DNA模板在7．8×10^1-7．8×10^8拷贝μl浓度范围内呈良好的线性关系，相关系数为0．997。该方法用于猪细小病毒的检测具有很高的特异性，其敏感性与常规PCR相比可以提高100倍，可以用于猪细小病毒的快速检测。  相似文献   

猪细小病毒SYBR Green Ⅰ模式实时定量PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

叶盛权  肖性龙  吴晖  郭祀远  余以刚  吴斌  贾赟 《中国动物检疫》2009,26(6):30-32

根据GenBank猪细小病毒(PPV)的NS1基因序列,设计一对特异性引物,采用SYBR Green Ⅰ随机结合渗入法,建立实时定量PCR检测方法,构建了检测PPV的标准DNA模版,循环阈值(Ct)与标准质粒DNA模板在7.8×101～7.8×108拷贝/μl浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.997。该方法用于猪细小病毒的检测具有很高的特异性,其敏感性与常规PCR相比可以提高100倍,可以用于猪细小病毒的快速检测。  相似文献   

猪伪狂犬病病毒TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立及应用   总被引：3，自引：1，他引：2  

刘园园  吴晖  肖性龙  贾赟  吴斌  余以刚 《中国畜牧兽医》2009,36(4):76-79

本研究针对猪伪狂犬病病毒的gE基因序列进行分析比较,设计了一条TaqMan-MGB探针,建立了区别野毒株及基因缺失疫苗株的荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法检测猪伪狂犬病病毒特异性强,能很好的区分猪伪狂犬病病毒与其它病毒。用该方法对83份疑似样本进行检测,与常规PCR检测法符合率达到100%,表明该方法用于检测猪伪狂犬病病毒具有良好的实用性。  相似文献   

食源性致病菌活菌检测技术研究进展     

邱杨  田聪  余以刚  肖性龙  李聪聪  刘建丽  赵丽  梅艳群 《中国动物检疫》2011,28(10):63-65

食品中的病原菌引起食源性疾病,影响食品安全。能够有效区分死菌和活菌的检测方法在实际运用中具有指导意义,食源性致病菌检测技术向着快速、简便、特异的方向发展。本文依据检测原理介绍了活菌检测技术的研究进展。  相似文献   

口蹄疫通用型实时荧光RT-PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

邱杨  肖性龙  刘建丽  梅艳群  岳学民  李惠芳  张经纬  余以刚  吴晖 《中国兽医杂志》2009,45(8)

口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的动物烈性传染病,世界动物卫生组织(OIE)和联合国粮农组织(FAO)将其排在A类传染病的首位,为各国检验检疫部门和农业部门重点监管的疫病之一.口蹄疫病毒血清型复杂多变,目前已发现7个血清主型,为检测带来了较大的难度[1].我国目前使用的口蹄疫病毒检测方法主要有病毒分离鉴定,病毒中和试验(VNT)等一些常规方法,但均存在着周期长和敏感性差,不能满足日益增长的口蹄疫监测需要[2].  相似文献   

多重荧光RT-PCR同时检测口蹄疫O A AsiaⅠ三种血清型     

邱杨  肖性龙  赵丽  刘建丽  余以刚  吴晖 《中国兽医杂志》2010,46(6)

口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是一种动物烈性传染病,被OIE列为A类家畜传染病之首。根据O、AsiaⅠ、A三种血清型FMDV的保守基因序列,设计特异性引物和以不同荧光素标记的TaqMan探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了检测O、AsiaⅠ、A三种血清型FMDV的多重荧光RT-PCR检测方法。结果表明,该方法有效、特异、敏感,对于口蹄疫病毒的诊断和疫苗的使用具有重要意义。  相似文献   

应用荧光RT-PCR技术检测高致病性猪蓝耳病病毒     

罗长保  肖性龙  鱼海琼  田纯见  林志雄  余以刚  吴晖 《中国兽医杂志》2008,44(1):85-86

猪繁殖与呼吸综合症（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种猪病毒性传染病。该病主要引起妊娠母猪早产、晚期流产、死胎、弱胎以及木乃伊胎。仔猪和育肥猪呼吸困难,呈间质性肺炎。公猪性功能下降,精液质量和精子活力受到影响。该病是进出口猪必须检疫的一种重要的猪传染病。  相似文献   

禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒灵敏性试验     

秦智锋  吕建强  肖性龙  张东林  李环玲  陈书琨  钟安清  黄运生  林庆燕  林镜中  刘胜利 《中国预防兽医学报》2006,28(3):336-340

为了确定深圳出入境检验检疫局和深圳太太基因工程有限公司联合研制的禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒对H5和H9亚型禽流感的灵敏度，通过测定已知鸡胚半数致死量（ELD50）的标准毒株的进行了定量。利用9～11日龄SPF鸡胚，对深圳出入境检验检疫局保存的H5和H9亚型标准禽流感毒株进行了鸡胚半数致死量（ELD50）的测定，结果为H5亚型禽流感毒株的半数致死量为10^-7.75/0．2mL，H9亚型禽流感毒株的半数致死量为10^-8.5／0．2mL。用所研制的禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒对H5和H9亚型标准禽流感毒株原液进行10倍连续稀释，进行实时荧光RT-PCR灵敏度的测定，结果发现：试剂盒检测H5亚型标准禽流感毒株的灵敏度为标准毒株10^-5倍稀释液，该稀释液含有281ELD50病毒量；检测H9亚型标准禽流感毒株的灵敏度为标准毒株10^-8倍稀释液，该稀释液含有15．8ELD50病毒量。同时检测H5和H9时，试剂盒的灵敏度要比单独检测一个亚型时的灵敏度增加一个数量级。本灵敏度已经能够检测到感染鸡的喉拭子和（或）泄殖腔拭子所采集的病毒量，能够满足检验检疫的实际需要。  相似文献