口蹄疫病毒VP1基因的原核可溶性表达     

王海烽  易忠  魏玉荣  魏婕  胡尔马西  符子华 《中国畜牧兽医》2009,36(10):50-54

针对重组原核表达载体表达目的蛋白以包涵体形式存在的问题,作者对影响外源蛋白表达的IPTG的浓度、温度、时间等因素均进行了探索,以观察VP1蛋白的可溶性情况。通过PCR技术将VP1基因克隆至pGEM-T载体中,然后将pET-28a(+)和pGEM-T载体分别进行双酶切,构建重组的pET-28a-VP1载体,将重组载体转化至BL21中,诱导后经SDS-PAGE检测可见约29 ku的目的蛋白条带。插入的外源目的蛋白主要以包涵体的形式存在,上清中的可溶性蛋白甚微。试验结果表明,这可能与蛋白本身的氨基酸组成有重要关联。  相似文献   

口蹄疫病毒VP1基因的原核可溶性表达     

王海烽  易忠  魏玉荣  魏婕  胡尔马西  符子华 《中国畜牧兽医》2009,36(10)

针对重组原核表达载体表达目的蛋白以包涵体形式存在的问题,作者对影响外源蛋白表达的IPTG的浓度、温度、时间等因素均进行了探索.以观察VP1蛋白的可溶性情况.通过PCR技术将VP1基因克隆至pGEM-T载体中,然后将pET-28a(+)和pGEM-T载体分别进行双酶切.构建重组的pET-28a-VP1载体,将重组载体转化至BL21中,诱导后经SDS-PAGE检测可见约29 ku的目的蛋白条带.插入的外源目的蛋白主要以包涵体的形式存在,上清中的可溶性蛋白甚微.试验结果表明,这可能与蛋白本身的氨基酸组成有重要关联.  相似文献   

O型口蹄疫病毒VP1基因在2种原核表达载体上的表达     

王海烽  易忠  魏玉荣  胡尔马西  符子华 《中国畜牧兽医》2009,36(10):65-67

设计1对引物将口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus, FMDV）VP1基因克隆到T载体上,通过Nde I和Xho I双酶切VP1基因和pET-28(a),在T4连接酶的作用下构建重组表达载体pET-28a-VP1;然后用EcoR I和Xho I双酶切VP1基因与pET-41（a）,在T4连接酶的作用下构建重组表达载体pET-41a-VP1;然后将这2个新构建的载体分别通过热冲击法转化BL21（DE3）,37 ℃不同IPTG浓度和32 ℃、0.01 mmol/L IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示pET-28a-VP1的表达量高于pET-41a-VP1,在DTT和乙醇的作用下,二者均没有可溶性蛋白出现。  相似文献   

用蛋白A胶体金免疫电镜技术观察绵羊进行性肺炎病毒   总被引：4，自引：1，他引：3  

胡尔马西  罗琼 《中国兽医科技》1993,23(1):42-43

  相似文献   

O型口蹄疫病毒VP1基因在2种原核表达载体上的表达     

王海烽  易忠  魏玉荣  胡尔马西  符子华 《中国畜牧兽医》2009,36(10):65-68

设计1对引物将口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)VP1基因克隆到T载体上,通过NdeⅠ和Xho Ⅰ双酶切VP1基因和pET-28(a),在T4连接酶的作用下构建重组表达载体pET-28a-VP1;然后用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切VP1基因与pET-41(a),在T4连接酶的作用下构建重组表达载体pET-41a-VP1;然后将这2个新构建的载体分别通过热冲击法转化BL21(DE3),37℃不同IPTG浓度和32℃、0.01 mmol/L IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示pET-28a-VP1的表达量高于pET-41a-VP1,在DTT和乙醇的作用下,二者均没有可溶性蛋白出现.  相似文献