猪德尔塔冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈小金  张霞  王玉玲  董志珍 《中国动物检疫》2018,35(9):95-100

根据GenBank登录的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)毒株序列设计特异性引物,建立了检测PDCoV的实时荧光PCR方法。该方法在标准品浓度2.49×10~8~2.49×10~2 copies/μL范围内线性关系良好;特异性试验显示,其他几种常见猪病病毒未见典型扩增曲线;敏感性试验显示,最低检测下限为24.9 copies/μL;重复性试验显示,批内和批间变异系数小于3%。用该方法检测62份猪腹泻粪便样品,相比常规PCR方法,前者的检出率更高;两种方法检测1 168份进境活猪粪便拭子样品,结果均为阴性。结果表明,本研究所建立的方法适用于国内猪场的PDCoV的检测和进境活猪的监控检测,也可作为PDCoV的诊断及分子流行病学调查的技术手段。  相似文献   

组学技术在山羊乳研究中的应用     

侯艳梅  吴桐  谢奎詹  智钧  陈瑶  吴红  刘晓红 《中国乳业》2019,(8):139-144

山羊乳是一种含有丰富营养成分的生物学流体,也是全球乳源的重要组成部分。山羊乳生物分子结构和功能一直是研究的热点,组学技术可以对这些生物分子成分进行全面分析。对蛋白质组学、脂质组学和代谢组学在山羊乳研究中的应用进行了综述。  相似文献   

关于天津市非洲猪瘟无疫小区创建工作的思考     

朱向东  陈小金  王犇  程少凯  李文钢  董志珍  梁智选 《猪业科学》2021,38(8):68-69

2019年12月,农业农村部组织制定颁发了《无规定动物疫病小区评估管理办法》（农业农村部公告第242号）、《农业农村部办公厅关于印发<无非洲猪瘟区标准>和<无规定动物疫病小区管理技术规范>的通知》（农办牧[2019]86号）等文件,随即启动了非洲猪瘟无疫小区建设工作。  相似文献   

牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株gD基因的克隆及在大肠杆菌中的表达     

庄东明  王建华  吴春涛  霍蕾  侯艳梅  赵祥平  牛钟相 《西北农业学报》2006,15(4):1-5

用PCR方法从感染牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu／67株的MDBK细胞中扩增gD基因，将之克隆到pGEM-T Easy载体。根据对gD基因的结构分析，设计合成3对引物，以获得的克隆质粒为模板，PCR扩增gD胞外域基因，将之分别亚克隆到pGEX-4T-2和pET-32a表达载体中构建成表达质粒pGEX-4T—gDQ、pGEX-4T—gDQB、pGEX-4T—gDHB和pET—gDQ、pET—gDQB、pET—gDHB，利用上述质粒分别转化大肠杆菌BL21和BL21（DE3），IPTG诱导后SDS—PAGE检测，结果pGEX-4T—gDQ、pGEX-4T—gDQB、pGEX-4T—gDHB和pET—gDQ四个表达质粒出现表达且符合预期大小，Western blot表明表达产物均有抗原性。  相似文献   

用环氧乙烷,滇化甲烷混合气体对进口动物产品熏蒸处理的效果及前景     

陈昌  侯艳梅  赵祥平  李凤鸣 《中国动物检疫》1996,13(1):9-9，37

  相似文献   

牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因的原核表达及产物的抗原性分析     

吴春涛王建华  侯艳梅赵祥平霍蕾  董志珍 《中国兽医科技》2006,36(7):523-528

采用PCR方法，以牛疱疹病毒Ⅰ型基因组DNA为模板扩增gB基因，克隆至pGEM—T载体。将以克隆质粒pGEM-T-gB为模板扩增的gBⅠ、gBⅡ和gBⅢ基因片段分别连接至原核表达载体pET32a。获得的重组质粒分别转化感受态细胞BL21（DE3），在IPTG诱导下表达。经SDS-PAGE鉴定，gBⅠ、gBⅡ和gBⅢ基因片段在大肠埃希氏菌BL21（DE3）中以融合蛋白形式获得了表达。以磁化组氨酸蛋白纯化系统对融合蛋白纯化后，Western-blotting和ELISA分析结果表明，这些融合蛋白均与BHV-1标准阳性血清反应，可作为抗原用于牛传染性鼻气管炎ELISA检测方法的建立。  相似文献   

四种羊传染性疾病诊断试剂的测试比对试验及结果分析     

王玉玲  侯艳梅  姜红 《中国动物检疫》2007,24(11):28-29

随着我国改革开放的步伐加快,我国畜牧业的发展也迎来了新的大好时期。从澳大利亚和新西兰进口的种羊数量增长很快。1995年至2000年从天津口岸进口种羊约2600只,2001年至2006年约4587只。大量动物进口的同时,也带来了动物疫病传入的风险。  相似文献   

从进口鱼粉中分离出两种不同生化型的亚利桑那菌     

秦贞奎  侯艳梅  薛振源 《中国动物检疫》1990,(4)

1989年6—8月期间,中国粮油食品进出口公司等九个单位,先后经天津港进口秘鲁、智利鱼粉15批次,47934吨,我所抽样检疫发现亚利桑那菌(Arizona)7批次共24607吨,并分离出了该菌的两种不同的生化型。  相似文献   

二种方法检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的比较     

王树成  赵祥平  董志珍  刘宏 《中国预防兽医学报》1997,(2)

分别用血清中和（ＳＮ）试验和单克隆抗体（ＴＧＥｍＡｂ和ＴＧＥ／ＰＲＣＶｍＡｂ）阻断酶联免疫吸附试验（Ｂ－ＥＬＩＳＡ）对８１头美国进口猪血清作猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）抗体检测。ＳＮ试验检出７份阳性血清，检出率为８．６４％；Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于ＳＮ试验  相似文献   

牛疱疹病毒I型gB基因原核表达载体的构建和高效表达          下载免费PDF全文

吴春涛  王建华  侯相山  霍雷  侯艳梅  牛钟相 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2007,35(1)

用PCR法扩增了牛疱疹病毒Ⅰ型B artha N u/67株gB基因,将其插入原核表达载体pBAD/TOPO中构建重组质粒pBAD-gB。将pBAD-gB质粒转化大肠杆菌TOP 10后进行了诱导表达,对表达产物进行了纯化和抗原性检测,并通过改变诱导剂L-A rab inose的浓度和诱导时间对诱导表达条件进行了优化。结果表明,重组质粒pBAD-gB构建成功,gB蛋白获得了高效表达,并以包涵体形式存在,纯化后gB蛋白的纯度达90%以上,gB蛋白抗原性良好,最佳诱导表达条件:L-A rab inose终浓度为0.2 g/L,诱导时间为5 h。  相似文献