斯氏艾美耳球虫ASP基因的克隆表达与免疫特性分析     

宋鸿雁  景瑾  董蓉莲  仇保丰  蒋荧梅  朱顺星  王生存  邵义祥 《中国兽医学报》2018,(4):676-681

根据免疫蛋白组学研究的质谱结果获得的部分氨基酸序列和已发布近源物种天冬氨酸蛋白酶(ASP)蛋白序列设计引物,通过cDNA末端快速扩增法(RACE)获得斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)ASP的全基因序列,将其连入原核表达载体pET-28a(+),转化Competent Rosetta2(DE3)pLysS,通过IPTG诱导表达重组ASP蛋白,并进行Western blot分析。结果显示,ASP序列全长为1 568bp,最大ORF为1 407bp。Western blot分析发现,ASP在诱导后37℃培养4h条件下有表达,但全部为不溶性表达;在诱导后20℃过夜培养条件下有表达,且有少量可溶性表达;证实重组ASP蛋白确实对E.stiedai有免疫原性。结果表明,试验成功获得E.stiedai ASP的全基因序列以及重组ASP蛋白。  相似文献   

国际贸易中涉及微生物的肠衣卫生安全新要求     

宋鸿雁  仇保丰  高雪梅  蒋荧梅  王晓颖  朱顺星  刘文斌 《中国动物检疫》2018,35(9):67-71

肠衣在我国农产品出口中一直占有重要地位。近年来多个国家针对进口肠衣提出了涉及微生物的卫生安全新要求。由于我国肠衣加工出口企业对此缺乏了解和重视,致使在应对时非常被动且损失较大。本文根据我国肠衣主要出口国家和地区的分布情况,结合多年来收集的肠衣进出口监督管理和科学研究文献资料,将世界动物卫生组织、欧盟、美国、日本和韩国等组织或国家涉及微生物的肠衣卫生安全新规定和新要求进行了梳理和总结,以期为我国肠衣加工出口企业提供第一手参考资料。  相似文献   

角膜混浊小鼠突变候选基因Map3k1克隆与序列分析     

吴刘成  刘春  蒋荧梅  王生存  邵义祥 《动物医学进展》2011,32(4):1-5

对具有角膜混浊表型的B6-Co突变系小鼠突变候选基因Map3k1进行克隆及测序分析,寻找该突变系小鼠Map3kl基因的突变位点.以小鼠Map3k1基因的mRNA、全长及上游5 kb序列设计引物,分别以基因组DNA和mRNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术分段扩增目的基因,将目的片段连接在T栽体上,转化至感受态细胞,...  相似文献   

冷冻原肠浸泡解冻池水细菌多样性分析     

仇保丰  宋鸿雁  董蓉莲  高雪梅  蒋荧梅  顾炳泉  胡顺林 《动物医学进展》2017,38(5)

为了研究冷冻原肠浸泡解冻池水的细菌多样性,采集3份水样直接提取细菌基因组总DNA,再分别用PCR技术扩增出细菌16S rDNA并构建基因文库,经PCR鉴定后从3个文库中分别随机挑取50个阳性克隆进行DNA序列测定。分别对3个文库的测序结果进行分析发现,除去24.00%~32.00%为无法鉴定的未培养细菌和未分类细菌以外,其余细菌来自于芽胞杆菌纲、γ-变形菌纲、放线菌纲和黄杆菌纲,分别占各文库克隆总数的38.00%~42.00%、20.00%~26.00%、4.00%~8.00%和0~2.00%。除去44株无法鉴定的细菌,进一步对其他106株细菌进行分析发现,其中2株放线菌目细菌和5株肠杆菌科细菌无法进一步鉴定,其余99个菌株包含了来自19个属的至少30种细菌,且肠球菌属、变形杆菌属和芽胞杆菌属为其中的优势菌属。本研究显示冷冻原肠浸泡解冻池水中细菌多样性较高,其中部分细菌为致病菌和条件致病菌。  相似文献