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【目的】探究咖啡酸苯乙酯（caffeic acid phenethyl ester,CAPE）通过AMPK/FOXO3a信号通路缓解氧化应激对猪精液的影响及其分子机制。【方法】选取8头成年（1—2岁）、健康状况良好长白种公猪进行鲜精采集,将质检合格的样品混池待用。试验设计如下：首先,在常温基础稀释液中分别添加0、0.02、0.04、0.06、0.08和0.10 g·L-1浓度的CAPE,将精液样品与各个浓度组依次混合后放置室温平衡,随即转入17 ℃电子恒温冰箱进行常温保存。全自动精子分析仪（CASA）测定1—5 d精子运动学参数（总活率与渐进性活力）,筛选出最佳适宜浓度为0.06 g·L-1。其次,将0.06 g·L-1 CAPE与400 μmol·L-1的H2O2建立氧化胁迫模型,在第1、3、5天分别采用CASA测定精子总活率与渐进性活力,荧光探针技术评估质膜完整性与顶体完整性,抗氧化试剂盒检测过氧化氢酶（catalase,CAT）与超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性,在第5 天利用实时荧光定量 PCR技术测定AMPK/FOXO3a信号通路下游靶向基因（AMPK、FOXO3a、SOD1、SOD2、CAT）及凋亡基因BAX的mRNA表达水平,蛋白免疫印记技术测定AMPK、p-AMPK蛋白表达。【结果】（1）浓度筛选试验中,0.06 g·L-1的CAPE在保存第3 天显著提高精子的总活率并维持至第5天（P<0.05）,不仅如此,精子的渐进性活力在第1 天显著高于其他处理组（P<0.05）。（2）氧化胁迫试验中,H2O2处理组的精子质膜完整性、顶体完整性、总活率、渐进性活力、SOD与CAT活性在保存的第5天均极限显著低于空白组与CAPE+H2O2混合组（P<0.001）,而空白组与CAPE+H2O2混合组的总活率、顶体完整性、CAT与SOD活性不存在显著差异（P>0.05）。与CAPE+H2O2混合组相比,H2O2处理组AMPK、FOXO3a、SOD1、SOD2、CAT的mRNA表达水平显著降低（P<0.05）,BAX的表达水平显著升高（P<0.05）,而空白组与CAPE+H2O2混合组的AMPK、SOD1、CAT与BAX不存在显著差异（P>0.05）。在蛋白表达水平中,CAPE+H2O2混合组与H2O2组相比,AMPK、p-AMPK 与p-AMPK/AMPK比率显著提升（P <0.05）。【结论】在常温基础稀释液中添加0.06 g·L-1CAPE可通过促进磷酸化AMPK的表达,诱导AMPK/FOXO3a信号下游抗氧化分子的转录,继而缓解H2O2介导的氧化危害对精液品质产生的影响,延长精液的保存时间,但CAPE保护精子氧化损伤更为深入的分子机制仍需作进一步探究。 相似文献
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抗冻蛋白（antifreeze proteins,AFPs）是一类能抑制冰晶生长并提高机体抗冻功能的蛋白质。AFPs来源广泛,在动物、植物、细菌、真菌等不同生物体内都存在。目前,研究较多、有望被推广应用于畜牧生产实践的主要是具有热滞活性和抑制冰晶重结晶活性的鱼类AFPs。鱼类AFPs的种类主要包括AFPⅠ、AFPⅡ、AFPⅢ、AFPⅣ和抗冻糖蛋白（AFGP）。尽管不同鱼类AFPs都具有抗冻功能,但是它们的组成和结构差异很大,而且对应的基因在核苷酸序列上几乎没有相似性。鱼类AFPs抗冻机制主要包括吸附-抑制学说、刚体能量学说、包合物锚定学说、亲和相互作用偶联团聚学说等。在人类、鱼类、家畜和小鼠等精液的低温保存中,鱼类AFPs可通过维持细胞膜完整性、抑制冰晶生长及减少DNA损伤等保护精子;在卵母细胞、精原细胞、红细胞及动物胚胎的低温保存中,鱼类AFPs可通过阻止冰晶化及抗氧化功能等改善保存效果。作者主要概述了鱼类AFPs种类及其结构特征和作用机制,总结了鱼类AFPs在精液、卵母细胞、精原细胞、红细胞及胚胎低温保存中的应用进展,以期为鱼类AFPs作为候选抗冻剂应用于种质资源保护和畜牧业生产提供科学依据。 相似文献
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小麦白粉菌无性阶段生物学特性研究初报 总被引：1，自引：0，他引：1
小麦白粉菌分生孢子萌发的温度范围为-2~34℃,最适为10~17℃。分生孢子离体后在2℃ 5天,7~17℃ 3天,20℃ 2天都还有侵染力。分生孢子在0~100%的湿度下都可以萌发,湿度愈大萌发率愈高,尤以在水面萌发率最高。分生孢子侵入寄主的湿度必须在65%以上,湿度愈大发病愈重。分生孢子在pH2.2~12.4的范围内都可以萌发,以pH4.2~7.7最适。紫外光对分生孢子有强裂的杀伤作用。在直射阳光下分生孢子的寿命比散光和黑暗条件下短。分生孢子荫发必须要有充足的氧气。光照能促使分生孢子的形成。在自然条件下,分生孢子形成有昼夜变化的规律,白天形成的孢子数比夜间形成的孢子数约大3倍。分生孢子传播的有效距离力15公里以上,传播的有效高度大于979公尺。 相似文献
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运用原生质体融合技术培育香菇新品种 总被引：2，自引：0，他引：2
对应用原生质体融合技术改良香菇的性状和创造新菌株进行了尝试。首先经品比试验,选出亲本材料Ｌ８６７、Ｌ７６Ｇｒ０４、Ｌ９３４、Ｌ９３７,再进行原生质体的制备,融合及融合子的再生,验证,分获１４、２０、２８株融合后代。 相似文献
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本试验旨在探讨于猪精液基础稀释液（BTS）中添加不同浓度的对香豆酸（P-coumaric acid,PCA）对猪精液质量及抗氧化酶活性的影响。在猪常温稀释制剂中添加浓度为0、0.03、0.06、0.09、0.12、0.15 g/L的PCA,利用CASA全自动精子分析仪与荧光探针技术分别在1~5 d内检测精子运动学参数与精子功能完整性;利用抗氧化试剂盒在1、3和5 d检测精子活性氧（reactive oxygen species,ROS）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平以及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性。试验结果表明,在精液保存的第5天,0.09 g/L的PCA处理组与空白组相比,精子活力显著提高（P<0.05）,精子的顶体功能完整性、质膜功能完整性、线粒体功能完整性也显著升高（P<0.05）,不仅如此,0.03、0.06、0.09和0.12 g/L PCA处理可显著降低精子ROS与MDA水平,提高SOD活性（P<0.05）,其中0.09 g/L处理组相比其他组抗氧化活性效果最佳,而当添加浓度为0.15 g/L时,精子的抗氧化活性与0.09 g/L组相比显著降低（P<0.05）。综上,猪常温基础稀释液中添加PCA可改善精子常温保存品质,添加0.09 g/L效果最佳。 相似文献
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表观遗传修饰是一种不依赖于DNA序列变化的可逆、可遗传修饰，在哺乳动物胚胎发育的整个阶段均可发生，是影响哺乳动物体细胞核移植效率的主要因素之一。其中，DNA甲基化、组蛋白的动态修饰、X染色体失活、端粒与端粒酶活性变化作为常见的表观遗传修饰类型，任一修饰形式的异常都会影响基因的表达，引发体细胞重编程错误导致核移植效率降低。近年来，随着体细胞核移植技术研究的不断深入，表观遗传修饰影响体细胞核移植效率的关键作用机制日益明确。本文通过综述不同类型的表观遗传修饰影响哺乳动物体细胞核移植效率的研究进展，以期在表观遗传修饰层面为提高哺乳动物体细胞核移植效率提供新思路。 相似文献
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