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为构建一种核酸免疫胶体金的制备方法,将抗体与寡核苷酸共价连接,并与含互补序列的寡核苷酸修饰的胶体金杂交。紫外扫描检测显示,使用4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐(SMCC)共价偶联修饰的抗体-核酸,抗体分子修饰核酸的数量最多。通过蛋白定量、琼脂糖凝胶电泳、盐沉、pH调节等试验,比较核酸免疫胶体金和传统静电吸附方式制备的免疫胶体金的抗体结合率、目标捕获率以及探针的稳定性,并初步测试了新型探针在试纸条检测上的应用。结果表明:构建的核酸免疫胶体金的抗体结合率比传统免疫胶体金高20%,探针捕获目标的效率高40%(以蓝耳病毒为例),稳定性更好(0.5～1 mol·L~(-1)盐浓度及pH 4～10),试纸条检测有明显特异性(以蓝耳病毒为例)。这一研究成功构建了一种具有更好抗体负载率、靶病毒结合率、稳定性的核酸免疫胶体金,有望替代传统的免疫胶体金,制备更稳定更灵敏的试纸条,用于抗原、抗体及病毒的快速检测。 相似文献
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为了探讨姜黄素处理对猪前体脂肪细胞脂质沉积的影响及其自噬激活机制在其中所起的作用,采用断奶仔猪皮下脂肪分离获得前体脂肪细胞,增殖培养至85%~95%融合,利用终浓度为0.1 mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、0.25μmol/L地塞米松(DEX)、5μg/m L胰岛素(Insulin)的诱导分化液诱导分化,同时给予姜黄素处理,随机分为2组:对照组(诱导分化液+姜黄素溶解试剂DMSO)和处理组(诱导分化液+10μmol/L姜黄素),48 h后收集细胞进行分析。结果显示:与对照组细胞相比,10μmol/L姜黄素处理对细胞增殖能力没有明显影响(P=0.82),但能极显著降低脂肪细胞中甘油三酯(TG)的沉积量(P0.01);与对照组相比,10μmol/L姜黄素处理能极显著增加自噬标志基因(LC3)和溶酶体酸性脂肪酶(Lipa)mRNA的表达(P0.01);Western blot显示,10μmol/L姜黄素处理能显著增加LC3的表达(P0.05),并促进LC3-I向LC3-II的转化。结果表明:姜黄素处理能显著抑制猪脂肪细胞脂质沉积,该过程可能是通过自噬激活机制来实现的,研究结果为畜牧兽医生产中姜黄素的应用提供理论支持。 相似文献
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