牛奶中雌二醇胶体金试纸条快速检测技术研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

白宇  张井  胡景炎  许永鹏  王树明 《中国畜牧兽医》2017,44(11):3351-3357

为了建立快速、敏感、特异的雌二醇（E₂）残留免疫检测方法,本研究应用胶体金免疫层析技术,研究制备一种快速检测牛奶中E₂的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,采用物理吸附法将E₂兔多克隆抗体偶联至胶体金,经过优化抗原包被量和多克隆抗体标记量等反应条件组装成检测试纸条,测定检测试纸的灵敏度、特异性、重复性和加速保存等参数,并对E₂类似物交叉反应和牛奶基质干扰反应进行了测定。结果表明,试纸条最优包被抗原浓度为2 mg/mL,抗体浓度为20 μg/mL。采用消线法判定结果,检测时间10 min,PBS缓冲液中E₂检测限为10 μg/L,该方法与雌三醇的交叉反应率为40%,与戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、雌酮、己烯雌酚、炔雌醚、乙炔雌二醇、壬基酚等类似物均无可见交叉反应,牛奶样品经2倍稀释消除基质干扰直接用于检测,该方法在牛奶样品中的判定值为20 μg/L。本研究建立的E₂胶体金试纸条使用简单方便,适合现场快速检测牛奶中E₂残留。  相似文献   

雌二醇单克隆抗体制备及间接竞争ELISA检测方法的建立     

白宇  胡景炎  许永鹏  何杰  金俊杰  李培德  刘素贞 《中国畜牧兽医》2017,44(10):3100-3105

为建立敏感、特异、快速的雌二醇（estradiol,E₂）残留免疫检测方法,本研究利用雌二醇人工抗原（E₂-BSA）免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备特异性雌二醇单克隆抗体,利用高效价、高特异性单克隆抗体建立间接竞争ELISA（icELISA）方法。结果显示,试验成功筛选获得一株稳定分泌抗雌二醇抗体的杂交瘤细胞株（3H3）,抗体效价可达1∶320 000,利用3H3腹水抗体优化间接竞争icELISA反应条件,检测抗体的敏感度,IC₅₀为1.636 ng/mL,IC₂₀~IC₈₀线性范围为0.202~13.281 ng/mL。雌二醇腹水抗体与雌三醇、乙炔雌二醇的交叉反应率分别达0.31%和0.25%,而与雌酮、戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、炔雌醚、己烯雌酚、壬基酚的交叉反应率均<0.1%。结果表明,利用本研究制备的单克隆抗体建立雌二醇间接竞争ELISA检测方法,可满足食品中雌二醇残留高灵敏度的检测要求。  相似文献