1株非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体识别的B细胞抗原表位的鉴定   总被引：1，自引：1，他引：0  

陈孝军  马俊  陈熊男  梁祎凡  高琦  黄钊  许润达  郑佳琛  郑泽中  张桂红  王衡  龚浪 《畜牧兽医学报》2022,53(7):2239-2251

旨在研究非洲猪瘟病毒(ASFV) p30蛋白的B细胞抗原表位,本研究制备了p30蛋白的单克隆抗体(mAb),并以该单克隆抗体为工具进行B细胞抗原表位定位。首先,通过原核表达及Ni柱亲和纯化获得p30蛋白,将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠进行杂交瘤细胞制备,通过间接酶联免疫吸附试验(iELISA)筛选出阳性杂交瘤细胞,并以细胞表达的方法制备单克隆抗体;采用间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白质免疫印迹(Western blot)对单克隆抗体的特异性进行鉴定。利用IEDB表位预测软件对p30蛋白B细胞抗原表位进行预测,根据预测结果对CP204L基因进行截短表达,利用IFA、Western blot和iELISA对其抗原表位进行鉴定。最后,利用噬菌体十二肽库对制备的p30单克隆抗体进行4轮生物淘选,筛选多肽表位,并与上述基因截短表达筛选方法进行比对。特异性鉴定结果显示,该单克隆抗体能成功识别感染猪肺泡巨噬细胞的ASFV;基因截短表达筛选结果表明,其识别的抗原表位区域为⁸⁴M～K¹⁴²;噬菌体淘选试验结果表明,¹¹⁶TSSFETLFE¹²⁴为本试验制备的单克隆抗体所识别的p30蛋白抗原表位核心序列,该结果进一步缩小了表位分布范围。本研究制备了p30蛋白的1株单克隆抗体,并对其抗原表位进行鉴定,为血清学诊断试剂的研发和p30蛋白功能研究奠定基础。  相似文献   

理化因素对非洲猪瘟病毒灭活效果的研究          下载免费PDF全文

龚浪  孙英硕  许润达  陈熊男  高琦  黄钊  陈孝军  郑佳琛  郭彦辰  吴芮霞  曾凡亮  王衡  张桂红 《华南农业大学学报》2023,44(3):348-356

【目的】了解我国非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的生物学特性及理化抗性，提高猪场生物安全水平以防控非洲猪瘟。【方法】通过红细胞吸附试验和qPCR试验验证不同理化因素(包括静置、温度、UVC照射、室内外干燥、阳光暴晒和消毒剂)对ASFV的灭活效果。【结果】UVC照射30 min即可灭活病毒，照射时间越长，ASFV核酸降解越严重；室内干燥2.5 d、室外干燥1.5 d、阳光暴晒30 min均可灭活ASFV，但不能降解ASFV核酸；常见消毒剂对ASFV的杀灭效果良好，各消毒剂按照推荐稀释浓度室温作用15或30 min，除碘酸混合溶液外均能使ASFV完全失活；温度升高(4、25和37℃)会增强消毒剂的消毒作用；有机物FBS的存在会削弱消毒剂的作用，且随FBS体积分数增加(0、10%和30%)消毒剂的消毒效果会降低。【结论】本文系统研究了常见的理化因素对ASFV灭活效果的影响，有助于全面了解ASFV生物学特性，对非洲猪瘟的防控具有重要指导意义。  相似文献