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根据NCBI NLRP3 cds(NM-001256770)序列设计1对特异性引物，构建标准品质粒pMD18T-NLRP3-189。通过反应条件优化、稳定性、敏感性等试验，成功建立了NLRP3的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法，用该方法定量检测猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)感染后的猪肺组织中NLRP3表达水平。最佳引物浓度为0.15μmol/L,建立的标准曲线方程为y=-3.5196x+36.968,E值为0.96,最低检测量为84个拷贝，熔解曲线有单一峰，批内变异系数CV为0.067%～0.184%,批间变异系数为0.221%～0.594%,重复性好。该方法检测仔猪在感染Mhp后肺组织中的NLRP3 mRNA表达水平，感染组与健康组相比差异显著(P<0.01),NLRP3表达水平明显增高，在感染后14 d可达到高峰，平均mRNA拷贝数达18 000左右，可持续42 d。表明该检测方法稳定性良好，精确度高，特异性强，为进一步研究猪炎症小体NLRP3的激活及其相关炎症反应机制提供了技术支持。 相似文献
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旨在建立猪视网膜上皮细胞(PRECs)的分离纯化及传代培养方法。采用组织块贴壁法和消化法分离猪视网膜细胞(PRCs),经差速消化法纯化细胞，筛选确定最优培养条件并鉴定细胞生物学特性。结果：消化法分离的细胞约1周长成单层，组织块贴壁法约2周长满单层，但活力更高；PRCs主要形态为长梭形和大理石样，呈现为2种形态细胞混合生长；差速消化法纯化细胞后，经间接免疫荧光鉴定细胞角蛋白(CK18和CK19),确定该细胞为上皮细胞；细胞接种猪圆环病毒2型(PCV2)可产生明显病变。综上，本试验成功分离获得PRECs,含胎牛血清浓度为12%的α-MEM为最优培养基，该细胞支持PCV2增殖并产生明显的细胞病变，为进一步建立稳定传代的猪视网膜上皮细胞系及研究PCV2感染及致病机理提供基础。 相似文献
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