猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及其免疫原性检测     

梁晓艳  李玉林  李兆学  王继美  贾丽锋  周贺娟  王云龙 《动物医学进展》2010,31(9)

以病猪脾脏组织为材料,提取总RNA,通过RT-PCR得到579 bp的猪圆环病毒2型(PCV-2)/ORF2片段,与原核表达载体pET32a重组,通过菌落PCR鉴定、双酶切鉴定及测序鉴定后,证实重组质粒pET32a/ORF2构建成功,将其转化入表达菌Balgold,通过IPTG诱导表达,利用Ni-NTA亲和层析纯化目的产物,Western blot验证其免疫原性,重组蛋白免疫Balb/c小鼠,检测小鼠体内中和抗体滴度。获得的重组蛋白包涵体的形式出现,表达量占菌体总蛋白的30%,变性纯化后纯度达90%以上,Western blot证实重组蛋白能与PCV-2阳性血清发生反应,免疫Balb/c小鼠45 d后中和抗体滴度达到1∶22。  相似文献   

甲型流感病毒NP蛋白原核表达及其金标检测方法的建立     

王云龙  贾丽锋  曹刚强  李玉林  李恒思  昌静峰 《动物医学进展》2010,31(10)

构建甲型流感病毒NP基因重组质粒,制备NP蛋白,建立甲型流感病毒胶体金检测方法。设计引物,扩增人工合成的甲型流感病毒株A(H5 N1)(GenBank登录号AY585439)NP DNA基因,构建pET-30 Xa/LIC-NP重组质粒,转化入原核表达系统E.coliBL21 Gold中进行表达和纯化。结果制备了纯度高达900 mL/L的甲型流感病毒NP融合蛋白,并初步建立了金标检测方法。  相似文献   

白酒中甲醇含量测定方法的改进          下载免费PDF全文

王刚  贾丽锋 《农业工程》2017,7(3):92-94

为了改进白酒中甲醇含量的测定方法，采用品红亚硫酸法对白酒中甲醇含量进行测定，系统分析该法测定中存在的干扰并探讨草酸-硫酸加入量、显色温度和显色时间等环节对试验结果的影响。试验结果表明，草酸-硫酸加入量为0.5 mL，显色温度20~25 ℃和显色时间30 min，为最佳测定条件。改进后的测定方法使甲醇含量测定试验结果更准确、重现性更好。   相似文献