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【目的】将玉米异分支酸合成酶1（ZmICS1）及系统获得抗性缺陷1（ZmSARD1）进行原核表达和纯化,并免疫家兔获得多克隆抗体,为深入研究ZmICS1和ZmSARD1在玉米抵抗病原菌胁迫中的功能奠定基础。【方法】克隆玉米ZmICS1和ZmSARD1基因CDS区,连接到原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌表达菌株Rosett-gami2（DE3）,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达His×6-ZmICS1和His×6-ZmSARD1重组蛋白,以透析纯化后的重组蛋白为抗原免疫家兔,制备多克隆抗体,并进行验证和检测。【结果】成功构建了原核表达载体pET-28a-ZmICS1和pET-28a-ZmSARD1,于37 ℃、0.84 mmol/L IPTG在大肠杆菌表达菌株Rosett-gami2（DE3）中诱导出His×6-ZmICS1和His×6-ZmSARD1重组蛋白。纯化蛋白免疫家兔,所得ZmICS1抗体能够检测到3 ng的His×6-ZmICS1,ZmSARD1抗体能检测到低至0.3 ng的His×6-ZmSARD,且分别能特异性地检测玉米B73原生质体过表达的ZmICS1和ZmSARD1蛋白。【结论】成功制备了玉米ZmICS1、ZmSARD1多克隆抗体,可用于玉米内源ZmICS1和ZmSARD1蛋白含量的检测。 相似文献
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大围山微型鸡(Daweishan Mini Chickens)仅分布在云南省红河哈尼族彝族自治州屏边县境内300~1 500m的中低海拔山区地带,尤以屏边县大围山为中心的玉屏镇、白河乡、湾塘乡居多,是我国具有独特遗传特性的亚热带型早熟地方家禽品种。综合红河州畜牧技术推广站、屏边县畜牧兽医局及云南农业大学相关研究报道认为:①大围山微型鸡来源于屏边县大围山系特有的野生原鸡;②大围山微型鸡属于目前所报道的我国地方鸡种中体重较轻的地方鸡种;③大围山微型鸡群体平均杂合度和群体平均多态信息含量较低,纯合度较高,未受到其他外来血液的混杂,是一个封闭的原始群体,具有较高的遗传一致性;④从屠宰性能指标显示,大围山微型鸡具有较高的屠宰率;⑤大围山微型鸡每千克体重所产当日枚蛋重相对大,饲料转化率相对高。 相似文献
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草莓主栽品种再生和转化的研究 总被引：41，自引：2，他引：41
建立草莓主栽品种高效、稳定的离体再生体系和遗传转化体系, 获得了转基因植株。‘弗吉尼亚’和‘森嘎拉’的叶片离体再生芽频率达到100 %。试管苗叶片与农杆菌菌株EHA105 共培养3 d。共培养后的叶片在附加卡那霉素40 mg/L 的再生培养基上选择培养4周后, 外植体再生出转化芽, 弗吉尼亚的转化芽再生频率可达6. 8 %。采用组织化学染色法对随机选取的10 个GUS 基因转化植株进行基因表达测定, 结果5 个植株强烈表达GUS 活性。转bar 基因植株在附加除草剂草丁膦10 mg/L 的培养基上能够正常分化, 在田间对草丁膦表现出强烈抗性。转基因植株开花、结果正常。 相似文献
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为研究紫花苜蓿鲜草对仔猪生长性能和血液理化指标的影响,选择体重20 kg左右健康的杜长大三元杂种仔猪60头,采用完全随机化设计分为4个处理,每个处理3个重复,每个重复5头猪,对照组不添加紫花苜蓿鲜草,3个试验组分别添加5％、10％、15％紫花苜蓿鲜草。结果表明,添加不同比例紫花苜蓿鲜草平均增重均高于对照组,其中5％、10％紫花苜蓿组显著高于对照组（P＜0.05）;料重比随着紫花苜蓿鲜草添加量的增加而增大,但组间差异不显著（P＞0.05）;每千克增重饲料成本以15％紫花苜蓿组最低（7.90元）,5％紫花苜蓿组最高（8.17元）。干物质消化率随着紫花苜蓿鲜草添加量的增加而降低,15％紫花苜蓿组最低,极显著低于其余各组（P＜0.01）;粗蛋白质消化率随着紫花苜蓿添加量的增加而降低,15％紫花苜蓿组最低,极显著低于其余各组（P＜0.01）;粗纤维消化率随着紫花苜蓿鲜草添加量的增加而降低,3个试验组均极显著低于对照组（P＜0.01）。血清总蛋白、总胆固醇、甘油三酯4组间差异不显著（P＞0.05）;血清尿素氮,对照组与3个试验组差异不显著（P＞0.05）,15％紫花苜蓿组极显著高于5％紫花苜蓿组（P＜0.01）;血糖,对照组与3个试验组差异不显著（P＞0.05）,15％紫花苜蓿组极显著高于10％紫花苜蓿组（P＜0.01）;高密度脂蛋白,10％紫花苜蓿组与15％紫花苜蓿组差异不显著（P＞0.05）,但均显著高于对照组和5％紫花苜蓿组（P＜0.05）。结果显示,仔猪饲粮中添加紫花苜蓿鲜草能提高仔猪增重,对血液理化指标无不良影响。在本试验条件下,推荐紫花苜蓿鲜草适宜添加比例为5％～10％。 相似文献
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【目的】制备玉米三磷酸甘油醛（GAPDH）和肌动球蛋白（ACTIN）的多克隆抗体,检测热激条件下玉米B73叶片中ZmGAPDH和ZmACTIN的表达,为将ZmGAPDH和ZmACTIN作为非生物胁迫下的内参基因奠定基础。【方法】利用DNAMAN 7对ZmGAPDH和ZmACTIN与不同植物同源蛋白间的氨基酸序列进行比对。通过PCR克隆ZmGAPDH和ZmACTIN的CDS,将其构建到原核表达载体pET-28a中并测序;将重组质粒载体转化大肠杆菌BL21（DE3）和RG2, 用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达;将目的蛋白透析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体。利用RT PCR和Western blot检测42 ℃热激不同时间（0,2,4,8 h）下玉米B73叶片中ZmGAPDH和ZmACTIN mRNA及其蛋白的表达水平。【结果】克隆了ZmGAPDH和ZmACTIN基因的CDS序列,成功构建了原核表达载体pET-28a-ZmGAPDH和pET-28a-ZmACTIN。在大肠杆菌中表达出了玉米ZmGAPDH和ZmACTIN蛋白,将纯化的蛋白免疫家兔后获得了多抗血清。ZmGAPDH多克隆抗体能清晰检测到4 ng原核表达的ZmGAPDH抗原,ZmACTIN多克隆抗体同样能够清晰检测到4 ng原核表达的ZmACTIN抗原。热激不同时间下玉米B73叶片中的ZmGAPDH和ZmACTIN蛋白表达水平一致,mRNA丰度稳定不变。【结论】成功制备了ZmGAPDH和ZmACTIN蛋白多克隆抗体;ZmGAPDH和ZmACTIN可以作为内参基因,用于检测热激条件下目标基因的表达水平。 相似文献
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介绍了目前所用的几种基因枪作用的原理、使用特点及在植物遗传转化研究中应用的现状。分析了影响基因枪转化效率的一些因素。 相似文献