水貂犬瘟热病毒微滴数字PCR检测方法的建立与应用     

闫曼平  商金源  叶京飞  罗国良  王振军  易立  冯二凯  王春霞  赵宗正  陈明军  魏先力  高华  单晓枫  程悦宁 《中国兽医学报》2023,(12):2445-2450

为建立检测水貂犬瘟热病毒(mink canine distemper virus, CDV)的微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量方法，以便提供水貂CDV在诊断检测方面的技术支持，本研究根据实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测方法原理，建立了水貂CDV数字PCR方法，并优化了反应条件，评估了特异性、敏感性以及重复性。结果表明：ddPCR方法检测CDV的最适引物浓度为900 nmol/L,探针浓度为250 nmol/L,退火温度为55℃,升降温度为2.5℃/s,最低检测下限为4.4拷贝/μL;除CDV特异性扩增，其他常见病毒特异性检测结果均为阴性；重复性试验的变异系数均小于5%。采用该微滴数字PCR和荧光定量RT-PCR方法对30份犬、貂、狐、貉等组织(其中CDV阳性样品7份)样品进行检测，检测结果与临床检测结果相符。本研究建立的微滴数字PCR方法对CDV定量检测特异性强、灵敏度高，重复性好，可以用于水貂CDV临床样品的核酸检测，对水貂CDV发病早期的诊断提供新的定量检测方法。  相似文献   

甲型H1N1流感病毒NS1蛋白核仁定位的研究     

赵宗正  涂加钢  张文婷  胡勇  周红波  金梅林 《中国动物传染病学报》2012,20(3):12-16

为研究2009年甲型H1N1流感病毒的NS1蛋白的核仁定位情况,采用RT-PCR对其NS1基因进行了扩增,将其克隆至PEGX-KG载体,构建重组质粒KG-NS1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达重组蛋白.然后采用GST柱亲和层析方法纯化NS1重组蛋白,免疫家兔来制备多抗,Western blot检测抗体.通过间接免疫荧光对表达不同长度NS1 (NS1-219、NS1-230、NS1-237)的3种重组流感病毒进行了核仁定位的研究,3种重组毒的NS1蛋白存在于细胞核和细胞质,但都不能定位于核仁,说明NS1蛋白的截短与否并不影响其核仁定位,其生物学意义有待于进一步研究.  相似文献   

养殖场来源的环境颗粒物特征分析     

李佳明  付莹莹  王中一  郭振东  赵宗正  张春茂  刘静波  钱军  张加力  刘林娜 《安徽农业科学》2018,46(7):80-82,149

养殖场是环境颗粒物(PM)的重要来源。高浓度PM对环境危害严重,影响人类和动物的健康。分析了养殖场颗粒物(PM)的来源、浓度、粒径大小及分布、化学组成,并提出了养殖场PM的减排措施。  相似文献   

埃博拉病毒糖蛋白GP1亚基融合蛋白的真核表达与纯化     

王中一  李佳明  付莹莹  郭振东  赵宗正  钱军  刘林娜 《吉林农业大学学报》2018,(4)

埃博拉病毒糖蛋白与病毒黏附、入侵宿主细胞等过程密切相关,为了更好地研究该糖蛋白与宿主细胞的相互作用,拟通过哺乳动物细胞表达系统,构建GP1亚基Fc标签融合蛋白。经鉴定,成功构建了埃博拉病毒糖蛋白GP1亚基的真核表达载体pFUSE-GP1-hIgG1-Fc2,并利用该载体及293T细胞构建了表达GP1亚基融合蛋白的哺乳动物细胞系。该融合蛋白N端带有IL2分泌信号肽,C端带有人IgG1-Fc2标签,可在293T细胞以分泌表达的方式存在于细胞培养上清中,而后利用Protein A亲和层析进行融合蛋白纯化。经Western Blots鉴定,成功制备GP1-Fc融合蛋白。本研究不仅为埃博拉病毒糖蛋白的研究提供了技术支撑,也为其它种类蛋白的哺乳动物细胞真核表达纯化提供了新思路。  相似文献   

低致病性与高致病性H7N9亚型禽流感病毒分子特征及受体结合能力分析     

薛玉涵  任助  商雨  唐国毅  贾妙妙  鲁岳峰  李琼琼  李慧敏  罗青平  温国元  潘兹书  赵宗正 《湖北农业科学》2020,59(7):212-216,封3

对2017年从鸡病料中分离到的2株H7N9亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)A/chicken/Hubei/093/2017(H7N9)和A/chicken/Hubei/207/2017(H7N9)(CK93和CK207)进行了全基因组测序。对血凝素(Hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)序列保守性、HA糖基化位点、NA耐药位点和6个内部基因的关键氨基酸位点进行了分析,同时测定了2株毒株的受体结合能力。结果显示,CK93毒株HA裂解位点为PEIPKGR↓GLF,为低致病性AIV特征;而CK207毒株裂解位点为PKPKRTAR↓GLF,为高致病性AIV特征。HA第226位氨基酸在CK93毒株为亮氨酸(226L),而在CK207毒株为谷氨酰胺(226Q)。但受体结合能力测定发现,CK93和CK207都具有结合α-2,3唾液酸受体和α-2,6唾液酸受体的特性,说明Q226L并非影响病毒受体结合特性的决定性因素。本研究结果提示应加强对H7N9亚型禽流感病毒变异监测预防其突变可能造成流行的风险。  相似文献   

三十烷醇在水稻上的应用试验     

金志伟  董长青  赵宗正 《辽宁农业科学》1983,(2)

三十烷醇是一种新型的植物生长刺激素,为了进一步摸清水稻施用的增产效果,我们在1981年小区试验的基础上,1982年又继续进行了浸种和扬花期喷施试验,为大面积生产使用提供依据。一、试验设计和方法浸种处理:0.5ppm 浸种24、48小时,1ppm浸种48小时,2ppm 浸种48小时,4ppm 浸种48小时,清水浸种48小时。扬花期喷施:浸种 喷0.5ppm,浸种 喷1ppm,浸种 喷2ppm,浸种 喷4ppm,浸种 清水,清水喷施。三次重复,随机区组,小区面积120平方米,总面积3亩。  相似文献   

基于SPR生物传感器的H5N1流感病毒快速检测方法     

王中一  陆兵  钱军  李京京  程洪亮  靳晓军  付莹莹  赵宗正  张春茂  郭振东  刘林娜 《中国农业大学学报》2019,24(1):76-81

为利用表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)生物传感器建立一种快速检测H5N1流感病毒的新方法。该研究利用SPR生物传感器以及H5N1单克隆抗体,对H5N1流感病毒样品进行检测分析。结果表明:该方法特性如下:1)可实现针对H5N1流感病毒的直接、快速和实时检测,整个过程无需任何标记;2)检测限为104.44 TCID50/mL,低于ELISA方法的103.24 TCID50/mL;3)在抗体消耗量方面,SPR技术要优于ELISA技术近100倍。  相似文献   

肉鸡与蛋鸡H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平调查     

李家凯  郭康康  刘丽娜  温国元  罗青平  李自力  董世山  邵华斌  赵宗正 《湖北农业科学》2020,59(11):104-106

为了解养殖场家禽中H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平,通过血清学调查,应用血凝抑制试验(HI)的方法,对四川内江、山东济南、河南鹤壁、江苏扬州4个定点实验观测站负责的养殖场的鸡血液样本进行禽流感病毒抗体分析,其中包含2个肉鸡场和3个蛋鸡场。研究发现蛋鸡场通常免疫了H5、H7、H9(或H5与H9)亚型禽流感疫苗,而肉鸡场只免疫了H9亚型禽流感疫苗;蛋鸡场和肉鸡场都存在免疫禽流感疫苗后抗体水平低和无抗体产生的情况,从而导致免疫不合格或免疫失败。以上结果表明,应加强家禽养殖场对不同亚型禽流感疫苗的免疫以及免疫后的禽流感病毒抗体水平监测,以防免疫失败,从而预防禽流感的发生和流行。  相似文献   

养殖场颗粒物的环境与健康危害研究进展     

李佳明  张加力  钱军  付莹莹  王中一  郭振东  赵宗正  张春茂  陈冠希  刘林娜 《畜牧与兽医》2018,(8)

养殖场是空气环境中颗粒物和微生物气溶胶的主要来源之一。微生物气溶胶是引起畜禽呼吸道疾病发生的重要原因,尤其是致病性微生物气溶胶,如口蹄疫、禽流感、布鲁菌病等每年给畜牧业生产造成巨大经济损失。颗粒物带来的环境和健康危害很大程度上与其形态、组成成分和浓度水平有关。明确及不断更新养殖场微生物气溶胶背景信息,是提出合理减排策略和有效控制其危害水平的重要依据,也是紧跟我国环境治理步伐以及加快改善生态环境系统的重要理论基础。  相似文献