BHV-1感染牛巨噬细胞对CD300a转录的影响     

王旭芬  安冬  侯琳  赵润涛  张贺  赵洋  张志丹  周伟光 《中国兽医学报》2023,(2):253-259

为探究抑制性受体CD300a在牛Ⅰ型疱疹病毒(bovine herpesvirus 1,BHV-1)免疫调控机制中的作用，分离鉴定了1株BHV-1内蒙古株，并建立CD300a基因的荧光定量PCR方法，检测BHV-1感染牛单核巨噬细胞后0,6,12,24,48,72 h 6个时间点以及空白对照组CD300a基因的转录变化。将β-actin基因作为内参，使用双标准曲线法计算攻毒组与对照组CD300a基因各时间段的相对表达量，分析CD300a在攻毒前、后的表达差异。结果显示，BHV-1分离株在MDBK细胞上出现典型细胞病变效应，测得其病毒滴度为10^7.23 TCID₅₀/mL。本研究建立的CD300a基因荧光定量PCR检测方法，CD300a基因和β-actin基因标准品的Ct值与模板浓度之间均具有良好的线性关系，溶解曲线均为特异单峰，最低检测限均为10拷贝/μL,具有良好的灵敏性，可以准确检测出BHV-1攻毒后巨噬细胞内的CD300a基因表达量。经计算，攻毒组CD300a表达量均高于对照组，其中，6,12,24 h的表达差异倍数显著高于0,72 h...  相似文献   

牛纽布病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用     

赵润涛  王旭芬  侯琳  张贺  赵洋  张志丹  周伟光 《中国兽医学报》2023,(1):66-71

牛纽布病毒(bovine nebovirus, BNeV)是国内近几年发现的引起犊牛腹泻的新病原，为了建立快速、准确且能定量分析BNeV的检测方法，本试验根据GenBank上发布的BNeV聚合酶基因(RdRp)序列设计合成了1对特异性引物和1条探针，并通过优化反应体系，成功建立了BNeV TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法并对临床样品进行检测。结果表示，该方法最佳上下游引物浓度均为500 nmol/L,探针浓度为400 nmol/L,在1×10⁸～1×10¹拷贝/μL之间呈现良好的线性关系，线性相关系数R²=0.996,扩增效率为105.9%;该方法特异性较强，在多个犊牛腹泻相关病原中，只检测出BNeV;敏感性较高，对BNeV质粒标准品最低检测下限为1×10¹拷贝/μL,而普通PCR对BNeV质粒标准品最低检测下限为1×10³拷贝/μL;重复性较好，组内变异系数和组间变异系数均小于3%;对2021年3-5月采自内蒙古地区牧场的37份犊牛粪样中BNeV的检出率为35.1%,...  相似文献