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为建立检测血清中布鲁氏菌抗体的间接ELISA方法,本试验采用PCR技术从羊种布鲁氏菌QY1菌株中扩增得到wzt基因片段,连接到pET-30a载体上,构建质粒pET-30a-wzt,将鉴定正确的质粒转化E.coli BL21（DE3）感受态细胞,经原核表达系统对其进行表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blotting进行分析后,用亲和层析镍柱纯化wzt重组蛋白备用。以wzt重组蛋白为检测抗原,逐步优化条件后建立布鲁氏菌间接ELISA检测方法。结果显示,试验成功构建了pET-30a-wzt原核表达载体,并在BL21（DE3）宿主菌中表达;SDS-PAGE和Western blotting结果表明,重组蛋白约为35 ku,表达形式为上清,条带单一、无杂带,有很好的反应原性和特异性。ELISA优化试验确定了最佳包被浓度为15 μg/mL,血清最佳稀释度为1：80,酶标抗体的最佳稀释度为1：5 000;通过检测24份阴性样品确定临界值,当样品D450 nm值≥ 0.30为阳性,样品D450 nm值<0.30时为阴性;特异性试验表明,该方法不与小肠耶尔森菌、大肠杆菌发生交叉反应;批内及批间变异系数均<10%;用该方法对120份血清样本进行检测,并与虎红凝集试验进行相符性验证,符合率为96%。本试验建立的间接ELISA方法为布鲁氏菌病的检测提供了可靠的技术手段。 相似文献
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实验旨在研究蛋氨酸脑啡肽(MENK)对禽马立克细胞MSB-1生长抑制作用和凋亡诱导效应。用MENK对禽马立克细胞MSB-1细胞株进行干预，采用光镜观察细胞密度及形态，MTT法测定细胞增殖抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡。镜下观察可见在10-12 mol/l MENK的作用下，MSB-1细胞株数量降低，细胞形态渐圆钝，甚至出现皱缩，与对照组相比MENK对MSB-1细胞具有明显的生长抑制作用，抑制率为19%~46%(P<0.01)，诱导细胞凋亡率为（62.04±3.32）%(P<0.01)。MENK对MSB-1细胞株具有增殖抑制效应及凋亡诱导效应，是具有发展潜力的抗肿瘤药物。 相似文献
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