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为进一步研究目的蛋白质在细胞内的定位,构建融合了红色荧光蛋白mCherry或mScarlet的表达载体。选取VTI12、RabD2a、ARA7以及SYP61等4个定位基因来构建红色荧光蛋白融合表达载体。根据TAIR数据库中相关蛋白质的基因序列设计引物,通过PCR技术扩增序列并将其分别连接到已制备好的红色荧光蛋白融合表达载体上,制备得到质粒后转化入原生质体进行瞬时表达。结果表明,成功构建了pUC18HE-NmCherry-VTI12、pUC18HE-NmCherry-RabD2a、pUC18-mScarlet NT-ARA7以及pUC18-mScarlet NT-SYP61等4个红色荧光蛋白融合表达载体,并且成功在拟南芥叶肉细胞原生质体中瞬时表达。 相似文献
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MYB相关CDC5 (Cell division cycle 5)蛋白对于细胞周期G2期的正常进行是必须的,但是在植物中对这种蛋白质的研究还较少涉及。本试验测量比较野生型拟南芥(Col-0生态型)和At CDC5 T-DNA插入缺失突变体(GK_278B09)的主根生长速度和长度,利用瞬时表达At CDC5-GFP研究At CDC5在拟南芥叶片叶肉细胞中的定位,同时利用At CDC5 N端144个氨基酸在大肠杆菌中进行原核表达和纯化,免疫家兔获得针对At CDC5的多克隆特异性抗体,从表型、细胞和蛋白质水平研究At CDC5基因的功能。结果表明,GK_278B09的主根因发育受到抑制而生长速度缓慢; At CDC5-GFP融合蛋白主要定位于细胞核中;经过分离得到的At CDC5蛋白抗血清能够有效地检测出10 ng原核表达的At CDC51-144抗原,并在原生质体At CDC5过表达体系中检测出1条分子量约为120 000的条带,此条带与At CDC5-GFP大小相近。本研究成功制备出At CDC5蛋白的多克隆抗体,为进一步研究At CDC5蛋白影响细胞周期从而影响植物生长发育提供了研究基础。 相似文献
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随着蛋鸡养殖走向规模化和正规化，采用科学的方法进行蛋鸡的饲养管理，已经被广大的养殖户所接受，并且在实际的工作中取得了较好的经济效益。但近些年来，随着疫病的不断增多，使养鸡的效益日益下降，成为制约蛋鸡效益的重要因素。尤其是蛋鸡腹泻的大面积发生，对产蛋率以及蛋的品质都造成重大影响。现将在日常饲养管理中蛋鸡腹泻的原因和防治方法分析如下，提供给养殖户进行参考： 相似文献
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【目的】研究玉米多药及有毒化合物外排家族(multidrug and toxic compound extrusion,MATE)基因ZmMATE884(GRMZM2G423884)在植物生长发育阶段的功能。【方法】以玉米全基因组DNA为模板克隆玉米MATE蛋白家族基因ZmMATE884,通过蛋白同源比对,预测其可能的跨膜结构域,并通过定量RT-PCR分析该基因的表达模式;构建ZmMATE884融合荧光蛋白瞬时表达载体,转化拟南芥叶肉细胞原生质体,进行亚细胞定位分析;通过农杆菌侵染技术,构建ZmMATE884基因的拟南芥转基因过表达系,观察表型;将ZmMATE884基因的拟南芥转基因过表达系与野生型种子分别种植于含质量分数1%蔗糖和不含糖的1/2 MS固体培养基上,分别黑暗培养6d和光照培养7d后,观测统计下胚轴的伸长情况。【结果】ZmMATE884基因在玉米根、上枝叶、下枝叶和胚中有较高表达;ZmMATE884蛋白部分定位于高尔基体/内体上;ZmMATE884基因的拟南芥过表达转基因植株表现为莲座叶发生速率加快且开花提前;在无糖和含质量分数1%蔗糖的1/2 MS固体培养基上黑暗生长6d及光下生长7d后,ZmMATE884基因的拟南芥转基因过表达系下胚轴明显短于野生型。【结论】玉米ZmMATE884基因参与了植物生长发育的调控,可加快莲座叶发生,促使植物提前开花,同时还参与下胚轴伸长的负调控。 相似文献
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