3-1E/mChIL-15融合基因构建及在真核细胞中的表达   总被引：1，自引：1，他引：0  

马德星  潘龙  郎跃深  杨静红  李广兴 《东北农业大学学报》2010,41(8)

将鸡堆形艾美尔球虫(E.acervulina)子孢子和裂殖子表面抗原3-1E基因片段与鸡白细胞介素15成熟蛋白基因片段(mChIL15)通过四个柔性氨基酸SPGS连接,构建并鉴定真核表达质粒pcDNA3.1/3-1E-linker-mChIL-15。表达质粒纯化后应用磷酸钙法体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光和免疫组织化学方法对重组质粒的体外瞬时表达进行检测。结果表明,成功构建了融合基因3-1E-linker-mChIL-15,转染后30h可检测到融合基因编码的融合蛋白在293T细胞中的瞬时表达。研究为鸡艾美尔球虫基因工程疫苗进一步研制及应用奠定了基础。  相似文献   

胆固醇对鸡传染性支气管炎病毒感染鸡胚肾细胞的影响     

李广兴  赵蕾  陈慧杰  郎跃深  刘鹏  黄小丹  王洪微  任玉东  张瑞莉 《东北农业大学学报》2017,48(4)

胆固醇是维持细胞膜脂筏稳定结构重要组分。一些囊膜病毒感染过程依赖胆固醇。研究利用Real Time PCR和病毒滴度试验,分析细胞膜和病毒囊膜胆固醇是否影响鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染鸡胚肾(CEK)细胞。结果表明,胆固醇萃取剂甲基-β-环糊精去除细胞膜胆固醇后,可抑制IBV感染CEK细胞并呈剂量依赖性,补充外源性胆固醇后,IBV感染力部分恢复,说明IBV感染依赖细胞膜胆固醇;去除细胞膜胆固醇可影响IBV感染侵入和释放过程。去除病毒囊膜胆固醇对IBV感染力无显著影响。IBV感染CEK细胞时依赖细胞膜胆固醇,而非病毒囊膜胆固醇。  相似文献   

牛白细胞介素2基因原核表达及多克隆抗体制备     

盖仁华  王衡  郎跃深  李广兴  张瑞莉  马德星  张国庆  杨贵君 《中国畜牧兽医》2011,38(12):71-75

根据GenBank发表的牛白细胞介素2(BoIL-2)基因序列,设计1对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增出重组牛白细胞介素2(rBoIL-2)基因。将克隆片段与pMD18-T载体连接,并经过酶切及PCR鉴定,测序结果显示,克隆的BoIL-2基因与GenBank发表的BoIL-2基因序列同源性为98.7%。将测序正确的克隆片段与pET30a(+)载体连接,构建重组表达质粒pET30a(+)-rBoIL-2,通过双酶切及PCR鉴定阳性的重组质粒进行序列测定后在大肠杆菌的表达,分子质量约为23.49 ku;表达产物主要分布在包涵体中。Western blotting证实所得到的重组蛋白为BoIL-2重组蛋白。用镍离子亲和树脂对所得的BoIL-2重组蛋白进行纯化,并免疫新西兰兔成功制备兔抗rBoIL-2多克隆抗体,为下阶段的研究提供了重要的试验材料。  相似文献   

SPF雏鸡感染网状内皮组织增殖病病毒后白细胞介素2和干扰素诱生 …   总被引：2，自引：0，他引：2  

李广兴  郎跃深 《中国兽医科技》2000,30(4):3-5

对１日龄ＳＰＦ雏鸡人工感染网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）后,胸腺Ｔ淋巴细胞白细胞介素２（ＩＬ－２）诱生活性于１４￣４９ｄ极显著低于对照组（Ｐ〈０．０１）;脾Ｔ淋巴细胞ＩＬ－２诱生活性于１４ｄ明显低于对照组（Ｐ〈０．０５）,感染后２１￣４９ｄ极显著低于对照组（Ｐ〈０．０１）;脾Ｔ淋巴细胞ＩＬ－２诱生活性于１４ｄ极显著降低（Ｐ〈０．０１）;脾淋巴细胞干扰素（ＩＦＮ）的诱生活性于感染后７￣４９ｄ极显著  相似文献