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【目的】 基于单细胞测序技术探究绒山羊毛乳头细胞标记基因,优化毛乳头细胞体外鉴定的方法,为研究绒山羊毛囊发生发育提供良好的细胞模型。【方法】 运用Seurat单细胞分析法分析陕北白绒山羊胚胎期60、90、120 d皮肤组织的单细胞测序数据。原始数据经质控、过滤、标准化后,采用UMAP方法进行数据降维与聚类分析。通过对比已报道的毛囊相关标记基因,获得完整绒山羊毛囊细胞类群谱系信息。通过基因差异表达分析,筛选绒山羊毛乳头细胞特异性标记基因。利用免疫荧光试验鉴定标记蛋白在绒山羊皮肤组织中的表达与分布情况,进一步筛选毛乳头区域特异性表达蛋白。体视镜下机械分离完整绒山羊毛囊,采用酶消化法分离绒山羊毛乳头区域并在体外培养至细胞分离,最终通过差速贴壁法纯化细胞。待毛乳头细胞纯度较高时,利用免疫荧光试验验证候选标记蛋白在分离细胞中的表达情况。【结果】 从单细胞水平分析了绒山羊毛囊发生过程中涉及的关键细胞转录信息,成功获得绒山羊皮肤中的17个主要细胞类群信息,鉴定出包括真皮细胞谱系、表皮细胞谱系、毛乳头细胞、毛干细胞、内根鞘细胞等绒山羊皮肤结构关键细胞类群,以及周皮细胞、巨噬细胞、肌肉细胞等其他功能细胞类群。筛选获得毛乳头细胞特异性基因427个,包括SOX2、FGF7、APOD、BMP3、HHIP、HEY2和SPON1等,这些基因在绒山羊毛乳头细胞中的表达丰度远高于其他细胞类型,被认为是毛乳头细胞特异性标记基因。组织免疫荧光试验进一步证明SOX2、FGF7与APOD等蛋白在绒山羊毛乳头区域内特异性表达,可用于皮肤组织中绒山羊毛乳头细胞的定位。此外,本研究在成功分离单根绒山羊次级毛囊的基础上,实现了绒山羊毛乳头区域的贴壁培养,成功观测到大量细胞从毛乳头区域逐步迁移分离的过程。细胞免疫荧光试验结果显示SOX2、FGF7与APOD均在绒山羊毛乳头细胞中表达,且SOX2阳性细胞约占毛乳头细胞总量的76%左右,而FGF7和APOD阳性细胞则占98%以上。结合绒山羊皮肤组织免疫荧光定位结果,SOX2、FGF7与APOD等标记可用于鉴定体外分离培养的绒山羊毛乳头细胞。【结论】 利用单细胞测序技术描述了绒山羊主要皮肤细胞的转录组信息,筛选出毛乳头细胞特异性表达基因。经免疫荧光试验证实,单细胞测序鉴定标记基因的方法简单高效,且具备较高准确率。筛选的SOX2、FGF7与APOD不仅为绒山羊毛乳头细胞体内定位提供了有效的标记,而且为多标记鉴定毛乳头细胞提供可能,更为进一步研究毛囊发育相关基因的功能及调控机制奠定重要基础。 相似文献
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间隔互插式连栋塑料温室结构及调控设施的优化设计 总被引：4，自引：0，他引：4
本文从优化的角度着手，就结构特点、自然通风、降温与保温，简易环境与控制，详细介绍了间隔互插式连栋塑料温室结构及调控设施的优化设计，生产实践表明：该型温室结构设计合理，具有优良的力学性能和价格优势。 相似文献
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将158份黄淮地区栽培大豆资源和138份野生大豆资源分别接种SMV东北3号株系和黄淮7号株系,重复鉴定1年。在供试的栽培大豆材料中,有14份材料对黄淮7号株系表现抗病,占出苗材料的9．79％;有36份材料对东北3号株系表现抗病,占出苗材料的39．13％;其中有7份材料对这两个株系都表现出抗病,占4．43％。在供试的野生大豆材料中,分别有3份材料对黄淮7号株系表现抗病,占出苗材料的3．06％;有6份材料对东北3号株系表现抗病,占出苗材料的4．72％。 相似文献
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<正>近年来,畜禽疫病的发病率、感染率和发病速度都呈上升趋势,并且疾病的混合感染、交叉感染和继发感染普遍存在。秋冬季节正是畜禽呼吸道疾病的多发季节,封闭的畜禽舍空气质量下降,群发性呼吸道疾病频发,特别是近年来,各地不断暴发禽流感、禽呼吸道多种病原并发症、猪呼吸道综合症,而且日趋严重,使养殖户蒙受巨大损失。畜禽舍空气电净化防病防疫系统依靠的是空间电场防病防疫技术理论,可起到空气净化、防病治病的目的。 相似文献
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<正>近年来,畜禽疫病的发病率、感染率和发病速度都呈上升趋势,并且疾病的混合感染、交叉感染和继发感染普遍存在。秋冬季节正是畜禽呼吸道疾病的好发季节,封闭的畜禽舍带来了空气质量 相似文献