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为深入了解弓形虫微线体蛋白9(MIC9)基因功能,以弓形虫RH株总基因组为模板PCR扩增MIC9基因片段,并构建MIC9的原核表达载体,采用Western blot对其免疫反应性进行鉴定分析。结果显示:扩增出大小为903 bp的MIC9基因片段,与预期结果一致;成功构建了pMD-18T-MIC9克隆质粒和pGEX-4T-1-MIC9原核表达载体,经过双酶切及测序鉴定正确,且能够在大肠杆菌中成功表达,表达蛋白的分子量为59 kDa;经免疫反应性鉴定,MIC9重组蛋白能够被弓形虫全虫抗体特异性识别,证明重组蛋白MIC9具有一定的免疫反应性。研究结果为弓形虫MIC9基因免疫功能的后续研究提供了参考。 相似文献
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研究通过比对鸽源和鸡源新城疫病毒M基因的序列,找到其差异位点并在保守区设计引物和TaqMan探针,建立了一种可以特异性检测鸽新城疫病毒的实时荧光定量PCR方法。以鸽新城疫病毒M基因阳性质粒为模板制作标准曲线并对检测方法的指标进行系统评价。结果显示,该方法的标准曲线为方程为:y=-3.334logX+37.837,相关系数R2=0.992;重组质粒标准品检测下限为1×101 copies/μL,比普通PCR灵敏100倍;特异性试验显示,该方法与鸡新城疫病毒不同毒株及其他常见禽类病毒无交叉反应;重复性试验的组间及组内的变异系数均小于2%,说明本研究建立的实时定量PCR检测方法敏感性高、特异性强、重复性好,可应用于鸽新城疫病毒的早期检测,为鸽新城疫病毒的防控提供了技术支持。 相似文献
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