尼帕病毒受体结合糖蛋白在哺乳动物细胞中的可溶性表达和纯化及小鼠抗血清制备     

高子函  宋丽娜  许汪  李乐天  郝鹏飞  伊立超  郝嘉翼  时小双  于成东  李凯  徐鹏  金宁一  李昌 《中国兽医学报》2022,(1):82-88,106

参照GenBank中尼帕病毒受体结合蛋白(G蛋白)编码序列,使用DNAStar软件对各基因型尼帕病毒G蛋白进行核苷酸、氨基酸同源性分析,并绘制进化树,选择代表性毒株(NCBI登录号:AF212302.2),截取合成G蛋白头部结构域(sG)的核苷酸序列,连接至pcDNA3.1(+)真核表达载体上,构建为重组质粒pcDNA...  相似文献   

猪δ冠状病毒RBD蛋白多肽抗体的制备与鉴定     

张国庆  姜宇航  张爽  李乐天  郝嘉翼  陈竞  邹万成  李昌  李太元  高旭  金宁一 《中国畜牧兽医》2023,(4):1575-1583

【目的】设计合成猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV)受体结合结构域(receptor binding domain, RBD)的抗原表位,制备并鉴定多克隆抗体。【方法】为了特异性检测PDCoV RBD抗原,应用生物信息学技术预测其潜在抗原表位,将表位氨基酸序列与δ冠状病毒属中的其他15株病毒株以及14株其他猪冠状病毒株进行相似性比对,将筛选的优势抗原表位与载体蛋白血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)偶联,合成多肽并免疫小鼠,制备PDCoV RBD特异性抗体。通过Western blotting试验对不同系统表达的PDCoV RBD以及PDCoV、TGEV和PEDV感染ST细胞表达的S蛋白进行鉴定,通过间接ELISA方法测定抗体效价。【结果】经序列比对,利用生物信息学技术预测合成的表位抗原与δ冠状病毒属中的其他15株病毒株(0～14.28%)以及14株其他猪冠状病毒株(0～7.14%)序列相似性非常低,具有良好的保守性;Western blotting结果显示,制备的多肽抗体1∶500、1∶1 000、1∶2 ...  相似文献   

猪流行性腹泻病毒纤突蛋白受体结合区(PEDV-RBD)重组蛋白的免疫原性     

伊立超  郝嘉翼  邹万成  李乐天  姜宇航  张爽  娄安钢  李昌  金宁一 《中国兽医学报》2023,(4):643-647

利用杆状病毒表达系统制备猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)纤突蛋白受体结合区(receptor binding domain, RBD)重组蛋白(PEDV-RBD),将其免疫3周龄断乳仔猪,分析其免疫原性。将PEDV-RBD P3代重组杆状病毒接种到悬浮SF9细胞中,收获后离心取上清液,将上清液超速离心浓缩重组蛋白。将仔猪分为免疫组、空载体对照组和佐剂对照组,分别用制备的重组蛋白、空载体表达产物和单纯佐剂免疫仔猪。结果显示,免疫后8周,PEDV-RBD重组蛋白组产生的特异性抗体效价达1∶12 800,中和抗体平均效价1∶284,最高达1∶512。流式细胞术分析CD3⁺CD4⁺双阳性T淋巴细胞显著高于对照组,表明重组蛋白具有良好的免疫原性,能够激发仔猪的体液免疫和细胞免疫应答。该研究为猪流行性腹泻疫苗研制提供了理论依据。  相似文献