绵羊胚胎成纤维细胞饲养层用于培养人诱导性多能干细胞的效果研究     

张世强  李孟心  韩高链  郭丽荣  赵迪鹏  李俊玲  郭田燕  杜荣  秦健 《中国畜牧兽医》2020,47(3):729-735

试验在体外分离培养1月龄绵羊胚胎成纤维细胞（sheep embryonic fibroblast，SEF），经丝裂霉素C处理后探讨其作为诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSC）体外培养饲养层的可行性。试验以SNL饲养层细胞为对照，人iPSC（hiPSC）为培养对象，通过形态学观察、碱性磷酸酶（AP）染色、以及实时荧光定量PCR和免疫细胞化学对hiPSC标志基因mRNA和蛋白表达的检测，比较了SEF细胞和SNL细胞作为干细胞饲养层的效果。结果表明，在试验期内，与SNL饲养层体外培养的hiPSC相似，SEF饲养层体外培养的hiPSC在形态上呈集落样生长，增殖速度快；AP染色呈蓝紫色，能够维持未分化状态；能正常表达多能性标志基因。两种饲养层细胞培养的hiPSC多能性标志基因c-Myc、Klf4、OCT4和SOX2 mRNA的表达以及OCT4、SOX2、SSEA4和TRA-1-60蛋白的表达并无显著差异（P>0.05）。本研究结果初步表明SEF可作为体外培养iPSC的饲养层细胞，为进一步建立可表达促生长因子的基因修饰SEF细胞系奠定了基础。  相似文献   

Myf5基因在不同时期绵羊胎儿半腱肌和背最长肌中的表达及生物信息学分析     

窦敏敏  赵迪鹏  王鹤洁  郭田燕  李俊玲  李君  王聪慧  秦健  李颖靓  杜荣 《中国畜牧杂志》2022,(5):124-130

为了研究MRFs家族中Myf5基因在不同发育时期绵羊胎儿骨骼肌中的表达规律及分子特性,实验采取妊娠30 d(E30)、50 d(E50)和70 d(E70)3个时期绵羊胎儿的半腱肌和背最长肌,用HE染色法观察了其显微结构,通过实时荧光定量PCR技术检测了Myf5基因的表达变化,同时运用生物信息学软件对绵羊Myf5蛋白的...  相似文献   

绵羊ATF3基因的生物信息学分析及其在营养剥夺应激下的表达变化     

李俊玲  郭丽荣  郭田燕  秦健  杜荣 《中国畜牧杂志》2021,(4):117-122

本研究旨在探究绵羊ATF3基因的蛋白特征、转录调控元件及其在营养剥夺应激下的表达变化。运用生物信息学相关软件对绵羊ATF3蛋白特征和ATF3基因启动子区元件进行分析预测,并在绵羊禁食3 d后检测骨骼肌中ATF3mRNA的表达量。结果显示,绵羊ATF3氨基酸数为187,分子式为C920H1521N273O282S12,等电点为8.89,不稳定系数是71.73,总平均疏水性值为-0.630;ATF3蛋白定位于细胞核,二级结构主要由α螺旋和无规则卷曲组成,三级结构与二级结构保持一致且可信度高;进化树显示绵羊ATF3与牛、山羊、猪的同源性较高;qRT-PCR结果显示,与正常组相比,禁食组绵羊骨骼肌中ATF3mRNA表达量极显著降低;绵羊ATF3基因启动子区存在CREB、NFKB、AP1和GRE等与应激有关的转录因子结合元件,暗示了ATF3表达量下调的原因可能与这些元件和相应转录因子的结合有关。  相似文献