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为了构建真核重组荧光质粒pEGFP-N1-Et HP,并筛选出Lipofectamine 2000介导的高效转染细胞,本试验将柔嫩艾美尔球虫假定蛋白(Et HP)基因扩增后插入真核荧光表达载体pEGFP-N1,构建真核重组荧光质粒pEGFP-N1-Et HP;测序成功后,用Lipofectamine 2000介导pEGFP-N1-Et HP转染4种细胞即Vero、DF-1、BHK、HD-11;用Western blot检测确定Et HP蛋白在4种细胞内的表达,并观察转染48 h后荧光表达情况,计算5个视野内带有绿色荧光的细胞数占细胞总数的比例,从而比较质粒与Lipofectamine 2000比例不同时4种细胞的转染效率[转染效率/%=(带有绿色荧光的细胞数/细胞总数)×100%]。测序结果显示,pEGFP-N1-Et HP构建成功。Western blot检测显示,Et HP蛋白在4种细胞中均成功表达;荧光显微镜观察到4种细胞转染后48 h均出现绿色荧光,表明重组质粒pEGFP-N1-Et HP成功表达。通过转染效率的比较,发现DF-1细胞转染效率均显著高于其他细胞(P<0.0... 相似文献
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[目的]为了探明红景天对柔嫩艾美尔球虫预防效果,对于发展养鸡业提供一定的指导意义.[方法]选12日龄100只商品代雏鸡随机分为5组,阴性对照组、阳性对照组、1.5％红景天组、1.0％红景天组及0.5％红景天组.14日龄时,除阴性对照组不攻虫外,其余4组分别口服接种4000个柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)孢子化卵囊.21日龄剖杀,同时测定所有鸡只的增重、存活率、盲肠病变分值、卵囊产量以及抗球虫指数(ACI).取各试验组鸡只的盲肠进行病理组织学观察,采集血清并测定相关的细胞因子.[结果]饲喂红景天的鸡在增重、存活率、盲肠病变分值、卵囊排出量以及ACI等指标上均优于阳性对照组,且低剂量组效果最好;在饲料中添加红景天可以显著降低感染鸡球虫后雏鸡血清中的白介素2 (IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和提高血清IgG的含量.[结论]红景天对感染柔嫩艾美尔球虫的雏鸡有一定的预防作用. 相似文献
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[目的]为了获得纯净的巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)裂殖子.[方法]对25日龄白羽肉鸡口服接种 3×105巨型艾美耳球虫卵囊,在其感染后48～124 h取十二指肠末端到卵黄蒂后5 cm处肠段,收集裂殖子并计数,确定分离裂殖子的最佳时间;将所取肠段均分为5段,分别对裂殖子进行计数,筛选分离裂殖子的最佳肠段;通过DEAE-52纤维素柱层析对裂殖子进行纯化并分管收集,确定收集较高纯度裂殖子的最佳时间.[结果]在感染后84 h所收集的裂殖子最多;此外,从空肠中后段及空肠末端肠段中分离出较多数量的裂殖子,占总数的62％以上;通过DEAE-52纤维素柱层析获得44 mL纯度较高的裂殖子.[结论]分离巨型艾美耳球虫裂殖子的最佳时间为感染后84 h,最佳肠段为空肠后段,收集1～44 mL洗脱液能够获得纯度较高的裂殖子. 相似文献
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