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为建立小反刍兽疫病毒(PPRV)、西尼罗病毒(WNV)、裂谷热病毒(RVFV)和南非型口蹄疫病毒(SAT FMDV)的高通量液相芯片检测方法,根据GenBank上公布的PPRV的N蛋白基因序列、WNV的E蛋白基因序列、RVFV的S片段基因序列和FMDV的5′UTR区基因序列,并基于各基因保守区设计相应的引物和探针.通过对多重PCR的上游、下游引物比例、杂交温度、杂交时间进行条件优化,并验证检测方法的特异性和敏感性.敏感性试验显示,该方法对于PPRV、WNV、RVFV以及FMDV 4种病毒最低检出量分别为5.78×103、2.15×103、2.98×105、9.54×104 copies/μL.本研究建立的高通量液相芯片检测方法能够同时快速地检测4种外来病病毒,具有良好的特异性、敏感性和稳定性,对于流行病学调查和防范外来动物疫病具有重要的意义. 相似文献
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本研究旨在评估巴氏杆菌糖酵解酶全部9个成员作为抗原对巴氏杆菌的免疫保护效应。通过PCR扩增出多杀性巴氏杆菌C51-17株糖酵解酶的基因并将其连接到pET-28a （+）质粒上。重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）工程菌后进行过夜诱导表达，收集菌体，超声破碎后取上清，纯化出巴氏杆菌糖酵解酶的重组蛋白。将巴氏杆菌糖酵解酶进行SDS-PAGE后转入PVDF膜上，孵育C51-17株感染康复血清，孵育二抗后进行ECL显色。将糖酵解酶免疫C57BL/6小鼠，待免疫组均产生高水平特异性抗体后使用C51-17株攻毒，比较各组存活率。测序结果显示，本研究成功将巴氏杆菌糖酵解酶全部9个成员的基因克隆到pET-28a （+）质粒上，经诱导表达和纯化成功获得了巴氏杆菌糖酵解酶的重组蛋白。Western blotting结果显示，磷酸葡萄糖异构酶（PGI）、丙糖磷酸异构酶（TPI）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GPD）、磷酸甘油激酶（PGK）、丙酮酸激酶（PYK）能与巴氏杆菌C51-17株感染康复血清反应。免疫保护力试验显示，PGI、醛缩酶（ALD）、GPD、PGK、磷酸甘油酸变位酶（PGM）、烯醇化酶（ENO）具有一定的免疫保护作用。本研究结果表明，巴氏杆菌糖酵解酶部分成员具有一定程度的免疫保护作用，为巴氏杆菌病防控研究提供了新的依据。 相似文献
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为建立小反刍兽疫病毒(PPRV)液相芯片检测方法,根据Gen Bank上公布的PPRV的N蛋白基因序列高度保守区设计引物与探针;对探针进行C12臂修饰后与荧光编码微球偶联,将偶联后的探针与PPRV的PCR产物进行杂交,在Bio-Plex系统上读取荧光信号,建立了小反刍兽疫病毒液相芯片检测方法,并对该方法的特异性和敏感性进行了研究,最终用建立的方法对临床样本进行检测。结果显示,该方法只与PPRV基因的PCR产物反应,而不与其他病毒基因反应,可检出的最低基因拷贝数为5. 78×104copies/m L,表明该方法具有良好的特异性与敏感性。利用该方法对25份临床样本进行检测,共检出阳性样本15份,与传统PCR方法检测结果一致。本研究建立了小反刍兽疫病毒的快速液相芯片检测方法,为进一步建立多种外来动物疫病的液相芯片检测方法奠定了基础。 相似文献
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为了解2016年春夏季安徽某奶牛场奶牛乳房炎的病原菌及主要致病菌的耐药性情况,采用PCR方法对奶牛场74份乳房炎病牛奶样及30份垫料样品中分离的菌落进行鉴定。结果显示:分离得到4种致病菌,共计147株,其中大肠杆菌108株,金黄色葡萄球菌8株,乳房链球菌29株,停乳链球菌2株;药敏试验显示,青霉素、阿莫西林和庆大霉素对引起该奶牛场的4种病原菌有较好的抑制作用。 相似文献
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