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为了在Sf9昆虫细胞中表达猪尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT) 1A1蛋白并对其进行功能鉴定。首先,合成密码子优化的UGT 1A1基因,克隆到载体pFastBacⅠ中,构建杆状病毒重组转移载体,然后导入DH10Bac中,获得重组的穿梭质粒,再转染Sf9细胞得到重组杆状病毒,采用Western blotting方法鉴定重组后UGT 1A1蛋白的表达;对镍柱亲和层析纯化获得目的蛋白酶的动力学参数及其对呕吐毒素(DON)的代谢进行检测。结果表明：pFastBac-UGT 1A1质粒被成功构建,导入感受态细胞DH10Bac中获得重组穿梭质粒Bacmid-UGT 1A1,再转染昆虫细胞Sf9获得重组Bacmid-UGT 1A1蛋白,能够与多组氨酸标签单抗发生特异性反应。优化目的蛋白表达,并对其体外代谢DON进行了酶学性质和动力学参数的研究。本研究通过基因克隆、表达和代谢产物的分析等技术手段获得具有较好的生物活性且纯化的Bacmid-UGT 1A1蛋白,为揭示DON在肝脏中的代谢途径、代谢产物和关键调控因子提供参考。 相似文献
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试验设计了大豆玉米4-2式、4-4式、6-4式3种复合种植模式和大豆单作、玉米单作5个处理，结果表明：大豆玉米复合种植比单作大豆或玉米增收效果明显，尤其比单作玉米增收效果更为显著。因此，应压缩玉米单作面积，扩大大豆玉米复合种植，以增加农民收入；规模化种植以6-4式更为方便实用，小农户小面积种植以4-2式增收效果最佳；大豆玉米复合种植应选择在水肥条件较好、基础设施完备的农田种植；大面积推广种植应具备配套机械，实现农艺农机深度融合，降低劳动强度和成本。 相似文献
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为研究围产期氟摄入对子代小鼠肝脏功能的影响，试验将48只怀孕昆明小鼠随机分成4组饲养。饲养期间饮水如下：对照组（饮用蒸馏水），低氟组（氟化钠浓度为25 mg/L的蒸馏水），中氟组（氟化钠浓度为50 mg/L的蒸馏水），高氟组（氟化钠浓度为100 mg/L的蒸馏水）。母鼠分娩21 d后，每组选取雄性仔鼠6只，断颈处死，采血，摘取肝脏。通过HE染色观察肝组织结构，ELISA法检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）的含量。结果表明，与对照组相比，低氟组局部区域肝细胞坏死，肝窦有充血肿胀且空腔变大，胞浆结构疏松；中氟组和高氟组肝细胞局部坏死、细胞核溶解，肝窦叶间静脉淤血，细胞排列紊乱；中氟组和高氟组血清AST、ALT极显著升高（P<0.01）。说明围产期氟摄入可造成子代小鼠肝脏功能损伤。 相似文献
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