猪2型圆环病毒ORF1基因的克隆及表达   总被引：3，自引：1，他引：3  

蒋智勇宋长绪  高向阳王贵平 赵亚华 《中国兽医科技》2004,34(5):3-7

根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)的ORF1基因序列，设计合成了1对引物，对PCV-2广东株(GD)ORF1基因进行PCR扩增，将扩增的ORF1基因克隆入pMD18～T载体，获得的重组质粒命名为pMD-ORF1。将ORF1的Kpn Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切产物插入原核表达载体pBAD／gⅢ C得到重组子，命名为pBAD／gⅢ—ORF1。序列分析表明，克隆的ORF1与德国分离株AF201897核苷酸序列的同源性高达99．5％；与其他PCV-2株的核苷酸序列同源性为92．1％～99．9％，推导的氨基酸序列同源性为90．2％～99．5％。同时，测序结果表明，克隆的ORF1准确插入了pBAD／gⅢC的多克隆位点，未改变读码框。用L-阿拉伯糖诱导表达，收集菌液进行SDS-PAGE和Western—blotting分析，结果表明PCV-2ORF1在pBAD／gⅢC中获得了高效融合表达，其表达蛋白的分子质量约为41ku。  相似文献   

口蹄疫病毒VP1基因密码子偏好性分析     

马园  仲亮  王国华  田普厚  张涛  武俊兰  刘月  马红艳  徐婉瑛  石顺利  张七斤 《中国动物检疫》2021,38(4):116-123

VP1蛋白是口蹄疫病毒(FMDV)的主要结构蛋白,可诱导机体产生中和抗体以及激发保护性免疫应答。为探究VP1基因密码子偏好性,筛选出其最佳体外表达系统,使用Visual Gene Developer、CodonW、GraphPad Prism等软件,对VP1基因进行密码子偏好性分析,同时将VP1基因密码子使用频率与大肠杆菌、毕赤酵母、昆虫杆状病毒和哺乳动物细胞表达系统作了比较。结果显示,VP1基因的CAI为0.21,ENC为55.43,GC3S为65.26%,表明该基因密码子使用偏好较弱并且密码子偏好以G/C碱基结尾。结合VP1基因与各表达系统密码子使用频率比值,发现其与昆虫杆状病毒表达系统频率比值差异最小且CAI最大,因此推断昆虫杆状病毒表达系统是FMDV VP1基因最适体外表达系统。本研究为FMDV亚单位疫苗研制等提供了技术基础。  相似文献   

初产蛋鸡腹泻原因简析     

赫秀娟  马红艳 《畜牧兽医科技信息》2010,(4)

在产蛋鸡中,尤其是刚开产的蛋鸡,常有腹泻发生,有的腹泻时间很长,有的甚至出现水样腹泻.其中水样腹泻的原因很多,可分为病原性和非病原性的.下面就这一情况做以简单分析.  相似文献   

猪圆环病毒2型GD株ORF2基因的序列分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

宋长绪赵亚华  蒋智勇王贵平 高向阳 《中国兽医杂志》2005,41(8):6-9

根据GenBank中猪圆环病毒2型（PCV2）0RF2基因序列，设计一对引物，应用PCR从本室鉴定分离的PCV2 GD株的细胞培养物中扩增出ORF2基因（702bp）。将此基因片段克隆入pMD18-T载体，筛选获得重组质粒pMD—ORF2并对其测序，结果表明所克隆的ORF2基因与其他PCV2的0RF2基因核苷酸序列同源性在92．1％～99．9％之间，推导的氨基酸序列同源性在90．2％～99．5％之间。  相似文献   

宁夏川区露地黄瓜套种菜豆高效栽培技术     

王燕凤  王燕丽  马红艳  杨振江 《中国园艺文摘》2009,25(11):107-108

在不增加投入的情况下，为进一步提高亩均效益，节约用地，延长生产供应期，对露地黄瓜套种菜豆高效栽培技术进行探索。通过试验与推广，效益显著。文章从茬口安排、品种选择、整地施基肥等方面对此项栽培技术进行总结，以供生产参考。  相似文献   

纳米银体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用研究     

楚品品  蒋智勇  李春玲  勾红潮  李艳  蔡汝健 《中国畜牧兽医》2022,49(11):4356-4363

【目的】 研究纳米银（silver nanoparticles,AgNPs）体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）的作用,并初步分析其抗病毒作用机制,为PRRSV的防控提供新思路。【方法】 使用0.1875、0.375、0.75、1.5、3、6、12 μg/mL AgNPs处理Marc145细胞,采用CCK-8试剂盒评估AgNPs对Marc145细胞毒性,确定其安全浓度。通过显微观察、间接免疫荧光试验、病毒滴度测定、实时荧光定量RT-PCR方法评估AgNPs体外抗PRRSV感染Marc145细胞的效果。通过间接免疫荧光试验和实时荧光定量RT-PCR方法评估AgNPs对PRRSV的直接灭活效果。通过实时荧光定量RT-PCR方法分析AgNPs对不同感染复数（multiplicity of infection,MOI） PRRSV （0.0001~0.1）黏附和入侵Marc145细胞的影响,以及PRRSV感染Marc145细胞3、6、12、18和24 h后加入AgNPs对Marc145细胞增殖的影响。【结果】 AgNPs对Marc145细胞的最大安全浓度为1.5 μg/mL,0.375、0.75、1.5 μg/mL AgNPs均具有良好的体外抗PRRSV活性,0.375、0.75、1.5 μg/mL AgNPs均对PRRSV起一定灭活作用。AgNPs对不同MOI的毒株黏附和入侵Marc145细胞均有一定抑制作用,且不同时间（3、6、12、18、24 h）加入AgNPs对PRRSV增殖均有一定抑制作用。【结论】 AgNPs具有良好的体外抗PRRSV活性,体外抗PRRSV的作用机制包括直接灭活以及抑制病毒的黏附、入侵和增殖过程。  相似文献   

猪红斑丹毒丝菌GZ株的分离鉴定及序列分析     

张乐宜  蔡汝健  蒋智勇  宋长绪 《西北农业学报》2014,23(7):31-38

2013年11月从广州某猪场发生急性败血症死亡的母猪心脏、肺脏、脾脏分离到1株病原菌,经形态学观察、培养特性、生化特性及16SrRNA、spaA基因测序,确定为猪红斑丹毒丝菌,命名为GZ株。结果表明,该菌株对阿莫西林、利福平、庆大霉素、头孢类抗生素高度敏感,对其他药物广泛耐药,对BALB/c小鼠的致死剂量为1.5×108 cfu/mL。测序结果与NCBI收录的猪红斑丹毒丝菌进行Blast比对分析,16SrRNA基因与不同地区分离自人、蛋鸡、猪、白海雕、野猪、野兔、鼠等动物的同源性为95.9%~99.8%。spaA基因与NCBI收录的分离菌株核苷酸同源性为98.9%~99.9%,氨基酸同源性为99.5%,3处发生突变,其中,第36位缬氨酸突变为亮氨酸,第203位异亮氨酸突变为蛋氨酸,第257位亮氨酸突变为异亮氨酸;与1998年和2006年日本1a型Fujisawa株的核苷酸同源性最高,为99.8%,因此确定分离的GZ株为1a血清型。  相似文献   

板蓝根多糖对雏鸡红细胞免疫黏附功能的研究     

王量  范红结  姚毅  马红艳 《黑龙江畜牧兽医》2014,(6):89-90

<正>板蓝根具有清热解毒、凉血利咽的功效,含有多糖、氨基酸、谷甾醇等成分。板蓝根多糖(BPS)能增强机体免疫系统的功能。目前,BPS对青脚麻雏鸡红细胞免疫功能的研究尚未见报道,本试验通过研究板蓝根多糖对青脚麻雏鸡红细胞免疫黏附功能的影响,探讨板蓝根多糖的作用机制,确定板蓝根多糖在兽医实践中的应用价值。  相似文献   

鹅雏育雏技术     

马红艳  赫秀娟  王立伟  张俭 《畜牧兽医科技信息》2010,(4)

白鹅的养殖方式基本是上以舍饲、半舍饲、放牧为主,但不论哪种养殖方式,养鹅成功的关键在于育雏阶段.现将育雏阶段的技术要点介绍如下: 1 把好选雏关 首先要选择健康的鹅雏.可归纳为"六看";一看来源.要求来自健康无病、生产性能好的鹅群;二看时间,要选择按正常孵化时间出壳的鹅雏.  相似文献   

包衣剂在直播水稻上的应用研究     

俞宏彪  赵梅娟  芦金刚  吴春梅  杨月萍  马红艳  王燕凤 《宁夏农林科技》2012,53(3):15+34

几种包衣剂在直播水稻上的应用试验结果表明,亮盾、稻籽乐包衣处理水稻苗情素质好,生长势强,叶色浓绿,根系发达,增产效果明显,产量增幅分别达29.5%、23.9%。  相似文献